HPV-E6E7mRNA-bDNA技术原理简介.ppt

SampleTitle关于bDNA技术的相关问题解答

SampleTitlebDNA技术平台branch-DNA(bDNA)技术原理是“三明治”核酸杂交，该技术的扩增特点是不经过呈指数增长的扩增过程，放大倍数确定，重复性，稳定性高。可以对mRNA做精确的定量检测及动态水平研究。它克服了传统的real-timePCR技术中的种种缺陷与不确定因素，无需抽提纯化RNA，无需反转录，无需PCR扩增，只要将样本用特定裂解液裂解后，经探针杂交与信号放大即可迅速得到更加精确的实验结果。除各种普通样本外，该技术对qPCR很难分析的血液样本与保存多年后mRNA高度降解的FFPE样本同样具有极高的准确度与重现性。

SampleTitlebDNA技术的根本的生物学反响流程Amplificationcalculation:amplifierno.(6,20)xlabelprobeno.(4;20)xtreeno.(3;6-8)

SampleTitleQuantiVirusTMassaycomponent(BasedonbDNAplatform)Component1:Coated96wellCapturePlateCapturePlate(96-wellplate)UniversalCaptureProbeComponent2:TargetSpecificProbeSetProbeSetCE’sLE’sBP’sSubstrateGlowLuminescenceAmplifierlabelAlkalinephosphataseconjugatedoligosBranchedDNA(Amplifier)Component3:bDNASignalAmplificationReagents

SampleTitleComponent1:Coated96wellcaptureplate(96孔捕获包被板〕该96孔板底包被有几百万支的单链DNA捕获探针,其序列为通用序列〔universalsequence),以3’端结合组分2〔探针组〕中的检测探针CE(CaptureExtender).Component2:TargetSpecificProbset(特制检测目标探针〕检测目标探针主要是由CE,LE,BL三个探针组成。CE主要连接被检测物和延长探针〔LE〕，LE和bDNA放大探针组结合，BL用于降低非特异性结合。Component3:bDNA信号放大局部bDNA信号放大探针为单链DNA，分两步逐级放大信号，共400倍信号放大，最终以化学发光，光信号表达。见以下图bDNA技术各组分解析

SampleTitle具体的常规操作流程

SampleTitle通过测得的光子数转换成的COPY数，为何代表的是真正病毒的活动度？1，软件内设了标准曲线2，阳性质控明确知道mRNA拷贝数值，我们的公式可准确转换光子数到拷贝数。3，结合bDNA的工作原理图，HPVE6/E7mRNA就是一个检测到的核酸片段，固定由几个分支DNA结合，分支DNA结合的荧光基团也是固定的，因此，可以进行定量分析。4，可比对荧光定量反响原理