实验动物与动物实验方法教案--动物实验的常用实验技术动物血液的采集方法.doc

PAGE

PAGE14

第三篇动物实验的常用实验技术

第一章动物实验的基本操作

第一节实验动物的编号

大鼠和小鼠的编号一般都用不同颜料涂染皮毛的方法来标记，常用的涂染化学品如下①涂染黄色用3～5%苦味酸溶液;②涂红色用0.5%品红溶液等。前者最常用。在动物固定的不同部位涂上苦味酸斑点表示不同号码。一般习惯在左前腿上为1，腰部为2，在左后腿上为3，在头部为4，在正中为5，在尾基部位6，在右前腿为7，在右侧要不为8，在右后退上为9，不涂染鼠为10。如果试验时动物编号超过10，可在动物同一部位上再涂染另一种涂染剂。

标记方法如图。

第二节动物的捉持和固定

一、小白鼠的捉持：捉拿时可先用右手抓住并提起鼠尾，置于实验台或鼠笼上，并稍向后拉；用左手的拇指和食指抓住小鼠两耳后颈背部的皮肤，将鼠置于左手心中，拉直后肢，以无名指及小指按住鼠尾或小鼠的左后肢即可。

二、大白鼠的持：大白鼠的捉拿时，可戴上手套。实验者可用右手捉住鼠尾，放在实验台或鼠笼上，并稍向后拉；左手掌面向鼠背，食指和中指压住鼠的头顶，拇指和无名指分别从鼠的两腋下插入，将鼠的两前肢卡住；或拽紧鼠后颈及后背皮肤即可。

三、家兔的捉持：用一手抓住家兔颈背部皮肤，将兔提起，另一手托其臀部，使兔呈坐位姿势。

第三节常用动物的给药方法

一、小鼠、大鼠常用的给药方法

1、灌胃（ig）：左手将动物固定后，右手持装有灌胃针头的注射器，自口角进针，沿上腭向鼠口腔的后下方插入食管。一般的给药量小鼠为0.1～0.3ml／10g，大鼠为1～2.0ml／100g。

2、皮下注射（sc）:常在背部皮下注射。一手固定动物，另一只手注射给药。一般给药量小鼠为0.1～0.20ml／10g，大鼠为1ml／100g。

3、腹腔注射（ip）:左手固定动物，右手持注射器，从下腹部外侧，呈45度角刺入腹腔，进针约3～5mm，一般给药量小鼠为0.1～0.3ml／10g，大鼠1～2.0ml／100g。

4、肌内注射（im）：多注射后肢股部肌肉。如一人单独操作，以左手拇指和食指抓住小鼠头部皮肤，小指、无名指和掌部夹住鼠尾及一侧后肢，右手持注射器刺入后肢肌肉给药。一般小鼠每侧不超过0.1ml。

5、尾静脉注射（iv）：将动物固定，鼠尾巴露在外面，用70%～75%的酒精棉球擦尾部，或将鼠尾浸入45～50℃温水中。待尾部左右静脉扩张后，左手拉着尾，右手进针。小鼠一般的给药量为0.1～0.2ml／10g。

二、家兔常用的给药方法

灌胃：（略）

皮下、肌内及腹腔注射：给药方法基本上同小白鼠，为针头稍大，给药量可稍多（皮下与肌内0.5～1.0ml／kg，腹腔1.0～5.0ml／kg）。

静脉注射：将家兔置固定箱内，拔去耳克外缘的毛，选择一条比较明显的耳缘静脉，用酒精棉球涂擦皮肤，使血管暴露。用左手拇指和中指捏住兔的耳尖，以食指垫在兔耳拟进针部位的下面，右手持注射器，从近耳尖处将针头刺入血管。推注时如有阻力，局部出现肿胀，表明针头部在血管内，应立即拔针重新穿刺。一般药液为0.2～2.0ml／kg，等渗药液可达10ml／kg。

第四节动物的性别鉴定

一般情况下，哺乳类动物性别依据动物的肛门与外生殖器(阴茎或阴道)之间的距离加以区分。雄性要比雌性的距离更长。

大、小鼠雌雄动物肛门与外生殖器间距离

第五节动物处死方法

1、颈椎脱臼法：本法常用于小鼠的处死。左手拇指、食指用力向下按住鼠头，同时右手抓住鼠尾用力向后上方拉，将脊髓与脑髓拉断，鼠即死亡。

2、断头法：用剪刀将鼠头剪断，由于脑髓与脊髓断离且大量出血，动物很快死亡。麻醉后的家兔也可采用此法。

3、击打法：提起鼠尾，用力棒击头部，或用小木棰打击头部，鼠痉挛立即死亡。家兔也可采用此法。

家兔等大动物常采用空气拴塞法、放血法、窒息法处死。也可用过量麻醉药注入法等方法处死动物。

第二章动物血液的采集方法

第一节大鼠、小鼠的血液采集方法

一、眶静脉丛（窦）采血

小鼠为眶静脉窦，大鼠为眶静脉丛。可先将动物侧眼向上固定体位，左手拇指及食指轻轻压迫动物的颈部两侧，使眶静脉丛（窦）充血。右手持注射器或硬质毛细玻璃管，用采血管由眼内角在眼睑和眼球之间向喉头方向刺入。若为针头，其斜面先向眼球，刺入后再转180°角使斜面对着眼眶后界。刺入深度：小鼠约2mm～3mm，大鼠约4mm～5mm。然后将采血管保持水平位，稍加旋转并后退吸引。

二、眶动脉和眶静脉取血

常用摘眼球法从眶动脉和眶静脉取血，多用于小鼠。操作时，用左手抓住动物颈部皮肤，将动物轻压在实验台上，取稍侧卧位，左手拇食指尽量将动物眼周围皮肤往眼后压，使其眼球突出充血后，用弯头眼科镊迅速夹去眼球，并将鼠倒置，头向下，眼眶内很快流出血液。一般取血量约为小鼠体重4％～5％。

三、