(1.3)--生化展示（还原糖检测）.ppt

;目录;;什么是还原糖？;;还原糖的常用测定方法

斐林滴定法

高锰酸钾滴定法

DNS比色法

MBTH分光光度法

酶电极法

;斐林滴定法

;影响因素：

滴定速度、加热时间、热源稳定程度等。

优点：

本法是国家标准分析方法，适用于所有食品中还原糖的快速测定，检出限为0.1mg，可进行微量测定。操作步骤简单易行，可不作定量配置。误差在0.002%左右，比较小。

缺点：

试剂要求现配现用,整个滴定过程必须使溶液处于沸腾状态，操作较复杂，时间较长。

;高锰酸钾滴定法：

;影响因素：

甲、乙试剂的配制及贮藏

澄清剂的选择

热源强度

抽滤和洗涤过程的密闭情况

;DNS比色法：

原理：

碱性条件下，还原糖加热可被氧化成糖酸及其它产物，而氧化剂3,5-二硝基水杨酸（DNS）则被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸

该产物在煮沸条件下显棕红色，在一定范围内，且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成正比关系

利用分光光度计在520nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，用比色法测定还原糖含量的

;影响因素：

测定波长，加热时间，试剂用量，放置时间，显色液体积等。

优点：

该法显色的深浅只与糖类游离出还原基团的数量有关，而对还原糖的种类没有选择性，故DNS方法适合用在多糖（如纤维素、半纤维素和淀粉等）水解产生的多种还原糖体系中。试剂稳定性好，操作简单易行快速，适合大批量样品。

缺点：

没有滴定法准确，会受其他糖类物质影响。

;MBTH分光光度法;影响因素：

测定波长、MBTH显色时间、反应产物吸光值的稳定性、

优点：

该法灵敏度高，理论上可以运用于微量还原糖的检测；

重现性好（不同浓度测定的变异系数小于10%）；

准确度高，结果稳定，操作简单，廉价，快速；

测定不受蛋白质、醋酸盐和琥珀酸盐缓冲液的干扰，对于不同聚合度的同类还原糖，其还原端的显色吸光系数基本相同，

缺点：

若所添加的试剂中含有酚类、芳香胺类、杂环化合物和具有活性亚甲基基团等还原性物质，会对实验产生较大影响；

与Fe反应的物质均对本法产生干扰

;酶电极法

原理：

在基础电极（可用pH电极、Pt(O2)电极、氧电极、Pt(H2O2)电极等）的敏感面装上固定化葡萄糖氧化酶膜，当电极插入待测溶液时，酶膜中的酶催化葡萄糖与氧反应生成葡萄糖酸和双氧水，导致原溶液pH和氧含量的改变，引起基础电极电位变化，由此测出该酶所催化的反应中葡萄糖的浓度。

;影响因素：

酶电极的稳定性主要取决于酶的性质和骨架电极，影响酶电极的响应时间的因素:搅拌速率、底物浓度、酶的浓度、溶液的pH值、温度、透析膜和酶反应层的厚度(7个因素)。

优点：

高灵敏度，准确、快速，成本相比较低等优点,适合常规使用，重现性及精密性较高，线性范围大，相关性好，适合临床快速检验，并可避免样品中颜色、浊度的干扰

缺点：

较其他方法结果不太稳定，不适合批量检测

;参考文献：

1.张永勤，薛长湖，汤浩源，王家林.还原糖的可见分光光度法研究进展[J].食品与发酵工业，2007，5：97-103.

2.赵凯，许鹏举，谷广烨.3，5-二硝基水杨酸比色法测定还原糖含量的研究[J].食品科学，2008，8：534-536.

3.管斌等.还原糖测定方法的规范[J].无锡轻工大学学报，1999，9：74-76.

4.张弛等.食品中还原糖测定方法的比较综述[J].食品安全，2018，10：93.

5.李雪梅，杨俊慧，张利群，孟庆军.还原糖测定方法的比较[J].山东科学，2008，2：18-20.

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