(1.1)--同工酶分析技术生物化学实验.ppt

;目录;;20世纪50年代前：未能深入研究;20世纪30年代至60年代：电泳技术的发展;20世纪50年代初：

同工酶分析技术开始产生，但影响不大;50年代后半到60年代：同工酶分析技术发展;21世纪：同工酶分析技术应用广泛;;同工酶的分离技术(简称同工酶技术)是近年来发展起来的一项新技术。它所依据的主要原理是将蛋白质结构的近代知识与同工酶概念联系起来，通过电泳和组织化学方法进行特异性染色而把酶蛋白分子分离，并将其位置和活性直接在染色区带标记出来。酶蛋白所显示的图象称为酶谱。

分离同工酶的方法有：电泳法、层析法、酶学法和免疫学法等。其中以电泳法应用最为普遍。

;电泳方法的分类;琼脂糖凝胶电泳;聚丙烯酰胺凝胶电泳;;琼脂糖凝胶孔径较大适用于分离同工酶及其亚型、大分子核酸等，应用较广。琼脂糖可以制成各种形状、大小和孔隙度。琼脂糖凝胶分离DNA度大小范围较广,不同浓度琼脂糖凝胶可分离长度从200bp至近50kb的DNA段。

聚丙烯酰胺凝胶电泳，普遍用于分离蛋白质及较小分子的核酸。聚丙烯酰胺分离小片段DNA(5-500bp)效果较好，其分辨力极高，甚至相差1bp的DNA段就能分开。;;基于Native的活性染色

基于SDS的酶谱（zymography）技术

;正染色和负染色

细菌染色

正染色/直接染色（positive/direct）：直接对条带进行染色，表现为白色（无色）背景下的有色条带。

负染色/间接染色（negative/indirect）：对背景染色，条带由于物质被反应而不被染色，表现为有色背景下的无色条带。

;正染色;;负染色;考马斯亮兰-银染复合染色;;植物遗传多样性分析;种质鉴定;疾病诊断和监测;疾病诊断和监测;参考文献;