植物组织培养基制备（植物组织培养课件）.pptx

培养基制备;培养基母液配制;一、培养基成分

培养基的成分主要包括水、无机营养、有机成分、植物生长调节剂、培养物的支持材料（如天然有机物、活性炭、抗生素、硝酸银、抗氧化剂、凝固剂等)。;1.水

代谢过程的介质和溶媒。

在配制过程中基本上用蒸馏,保证母液及培养基成分的精确性，防止贮藏过程中发霉变质。

在大量生产过程中，用的是自然水。;2.无机营养

植物所需浓度大于0.5mmol/L的矿质元素称为大量元素。

（N、P、K、Ga、Mg、S）

植物所需浓度小于0.5mmol/L的矿质元素称为微量元素。

（Fe、Mn、Cu、Mo、Zn、Co、B）

;①N。功能：是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生物碱等的组成成分，是生命结构和功能物质不可缺少的。;④Mg、S和Ca。

功能：Mg是叶绿素的组成成分，又是激酶的活化剂；

S是含硫氨基酸所构成蛋白质的组成成分。

Ca是构成细胞壁的一种成分，对细胞分裂、保护质膜不受破坏有显著作用;微量元素

功能：铁是一些氧化酶、细胞色素氧化酶、过氧化氢酶等的组成成分。同时，它又是叶绿素形成的必要条件。;3、有机成分

（1）碳水化合物

糖类（碳源、能量，维持培养基一定的渗透压。）使用浓度：2--3%，常用3%。

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（2）维生素类

种类：主要有VB1（盐酸硫胺素）、VB6（盐酸吡哆醇）、VB3(烟酸)、VC(抗坏血酸)等。一般用量为0.1-1.0mg/L。;（3）肌醇

构建细胞壁。一般浓度为100mg/L

（4）氨基酸

常用种类：甘氨酸。在10-1000mg/L之间。;（5）天然有机化合物

常用的有椰乳、番茄汁、马铃薯、水果提取物、酵母提取物等。一般使用浓度在10-20％。;二、培养基植物生长调节剂与辅助成分

1.植物生长调节剂

（1）生长素类

常用的生长素有IAA、IBA、NAA、2,4-D等

其活性强弱为2,4-DNAAIBAIAA;

功能：诱导愈伤组织形成，诱导根的分化,促进细胞分裂、伸长生长。在促进生长方面，根对生长素最敏感。在极低的浓度下，就可促进生长,其次是茎和芽。;（2）细胞分裂素

是腺嘌呤的衍生物，包括6-BA（6－苄基氨基嘌呤）、Kt（kinetin激动素）、ZT（zeatin玉米素）等。其中ZT活性最强，但非常昂贵，

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常用的是6-BA。细胞分裂素浓度为0.05-10mg/L。

作用：①诱导芽的分化促进侧芽萌发生长，②促进细胞分裂与扩大。③抑制根的分化。

;2.其他物质

（1）琼脂

琼脂只是固化剂。90℃以上成为溶胶，冷却至40℃凝固

用量：在6-10g/L之间;（2）活性炭

吸附性，通常使用浓度为0.5-10g/L。;（3）抗生物质。种类：抗生物质有青霉素、链霉素、庆大霉素等，用量在5～20mg/L之间。作用：防止菌类污染。;（4）抗氧化物。种类半胱氨酸，常用50～200mg/L的浓度，其它抗氧化剂有二硫苏糖醇、谷胱甘肽、硫乙醇、及二乙基二硫氨基甲酸酯等。;（5）其它。有玻璃纤维、滤纸桥、海绵等，总的要求是排出的有害物质对培养材料没有影响或影响较小。;三、培养基母液配制

母液是欲配制液的浓缩液，这可保证各物质成分的准确性及配制时的快速移取，并便于低温保藏。一般配成比所需浓度高10--100倍的母液。;;配制方法常有两种：

一是可以将培养基的每种成分配成单一化合物的母液，便于配制不同种类的基本培养基时使用；

二是配成几种不同的混合溶液，一般配成大量元素、微量元素、铁盐、维生素等母液，其中维生素、氨基酸类可以分别配制，也可以混在一起。;;;2.母液配制的计算

已知扩大倍数、规定量单位浓度和母液体积，求某一化合物的称取量。

称取量=规定量单位浓度×扩大倍数×母液体积

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例1：若要配制GaCl2·2H2O的母液，其规定量浓度为440mg/L，要求扩大10倍，母液体积为250ml，求所需GaCl2·2H2O的称取量。;?;表1MS母液配制;母液种类;表1MS母液配制;母液种类;;例：配制0.1mg/mlNAA母液100ml。

计算，称取用量。0.1X100=10mg

溶解，加入少量95%酒精后，倒入60~80ml蒸馏水溶解

定容，100ml

装瓶，贴标签，放1~5℃冰箱中冷藏。

;5.母液保存

需注明母液名称、用量(ml/L)或倍数或浓度(mg/ml)、配制时间及配制人，然后置于4℃冰箱中保存。母液保存过程中要定期检查，发现有沉淀出现或霉菌产生应弃之无