组培试验方案—植物离体快繁技术（植物组织培养课件）.pptx

岗位提升

组培试验方案设计;【知识点】

掌握离体组织的再生途径

组织培养的基本过程

植物微体快繁方法

【技能点】

会植物快繁技术

素质要求：培养学生无菌意识、创新意识、团队合作意识和生态环保意识；具有任务执行力，规范操作、注意安全；科学严谨、实事求是的工作态度。;一、植物离体快速繁殖的概念;2、意义和作用;3、应用;二、离体快速繁殖程序;（1）无菌培养体系的建立

从外植体选择、清洗、灭菌、接种和茎芽诱导，到获得茎芽稳定生长和增殖，茎芽繁殖数量可控制的整个时期。

目标：获得无惧培养材料，诱导芽的发生。提供合适的试管环境使培养物（茎芽）的生长达到稳定。;

无菌苗：在无菌条件下，用于试管内继代增殖的植物材料，称为无菌苗或“无菌母株”或“繁殖母株”。;外植体的灭菌

在一定浓度的灭菌剂药液中浸泡灭菌。

药剂灭菌的好坏关系着培养的成功率。

根据材料、灭菌剂、经验等决定灭菌剂种类、浓度和处理时间。

如：药剂对各种菌类的杀灭效果。

如：材料对杀菌剂的忍耐力。;(2)增殖培养

促进培养物分化培养，反复继代增殖，达到需要数量。

芽增殖途径对增殖结果影响大。

芽增殖速度快、慢的关键是培养基。（适宜外源激素种类和浓度配比极其重要）。

（细胞分裂素与生长素影响繁殖系数好不定芽质量）;试管苗的繁殖速率及计算;提高繁殖速度的方法：

改进培养基：培养基种类、无机及有机成分、糖浓度、琼脂、植物生长调节剂的种类和浓度。

（生长素比例大，不定芽生长健壮，细胞分裂素高，繁殖系数高，但组培苗细弱，要将二者比例调整到适宜水平。）

改善培养条件：温度、光照（光强、光质、光周期）、湿度、培养器皿、通气状况、培养基的pH值等都与材料的增殖密切相关。

培养物保存：当暂时不需要育苗或珍贵资源需保存时，采用低温（1-9℃）进行的中短期保存。;芽增殖过程中，值得注意外源激素的累积。

长期继代增殖，外源激素的大量积累会造成各种畸形芽（茎）、玻璃化芽,影响不定芽质量。

继代培养中需要酌情降低外源激素水平。;（3）诱导不定根形成

目标：使诱导培养??来的芽丛或不定芽生出不定根，形成完整的小苗（Plantlet）。

功能：保证组织培养不定芽生根，提高适应环境能力。

壮苗和生根：对不定芽进行壮苗培养，诱导生根。;诱导生根的途径;诱导根分化技术关键：

1）调节外源激素种类和浓度。生长素/细胞分裂素。

2）调节基本培养基营养组成。

3）调大量元素中硝酸盐和铵盐的含量和比例。

4）降低大量元素和微量元素的用量。

5）调节渗透压，降低糖浓度。;(4)生根苗的炼苗驯化和移栽

1）将小苗进行分级

苗高和根数是评估移栽苗的重要指标。

2）移栽前炼苗

移植前要加强自然光照，使小苗逐渐适应外界环境。

（在自然光的炼苗室中闭口自然光炼苗2-3周，开口炼苗1-3天。待小苗茎叶绿色加深，根系颜色由白色变为黄褐色即可移栽出瓶。）;生根苗的炼苗驯化和移栽：

3）湿度锻炼：使小苗逐步适应周围环境的湿度。移栽前开瓶盖进行湿度锻炼。

4）基质疏松：珍珠岩、蛭石、西沙，营养土、腐殖土等。

5）调控光、温、湿等因子：生长季闭口炼苗期间调控光照强度、防雨水影响。部分遮光条件下移栽后管理，保持合适温度。;移苗注意：

苗盘消毒：用0.1%的高锰酸钾对苗盘进行浸泡消毒或喷淋消毒。

基质消毒：对已用过的需用0.1%高锰酸钾喷淋后用自来水冲洗干净。;苗盘移栽：

将消毒后的蛭石或珍珠岩放在苗盘内，厚度约4-6cm，用水淋透后，将洗净的组培苗栽植在培养基质内，用水喷淋透后放置在拱棚内保护培养2-3周。保持温度和湿度。;营养钵移栽：

营养钵与营养土的准备：营养土最好采用腐殖土与细沙（或蛭石）按照3：1的比例混合过筛后备用。将组培苗从苗盘提出，栽植在营养钵中，浇一次透水后集中摆放在不易积水的地方，遮荫、保温、保湿。;移栽后的管理：

遮荫和保湿。移栽初期防止阳光直射，逐渐增加日照时间和强度，提高自养能力，提高成活率。塑料膜保湿和喷雾保湿结合。;（5）再生植株的鉴定意义

培养时取材部位不同、器官发生途径不同、培养基中各种物质，特别是植物外源激素，对植物细胞构成化学诱变环境。那些在遗传上可塑性强的种和那些易于器官发生型的植物种的再生植株群体，可能会发生变异，故需要进行鉴定。

;方法;离体快速繁殖程序;三、组培分化过程的类型;1.无菌短枝和芽丛型

选取顶芽或腋芽，促进其生长和诱导不定芽并使其生根形成植株的方式。;顶端优势效应应抑制腋芽生长。将腋芽从植物上分离，给相应培养条件，形成大量不定芽。

特点：繁殖率高、繁殖数量大、保持遗传稳定性。

例如：草莓，半个月内可增加10倍，1年内1棵草莓可产生数以百万计的试管苗。;3）器官发生型

从器官诱导愈伤组织，经细胞再分化生成植株的方式。

例：禾本科：甘蔗、水稻、小麦、大兰茎草、印