DB32_T 4727-2024 鳜鱼传染性脾肾坏死病诊断及综合防控技术规程.docxVIP

ICS65.150

CCSB52

江

苏省地方标准

DB32/T4727—2024

鳜鱼传染性脾肾坏死病诊断及综合防控技术规程

Technicalcodeofpracticeforthediagnosis，prevention，andcontrolofinfectiousspleenandkidneynecrosisinmandarinfish

2024-04-03发布

2024-05-03实施

江苏省市场监督管理局发布

Ⅰ

DB32/T4727—2024

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由江苏省农业农村厅提出。

本文件由江苏省渔业标准化技术委员会归口。

本文件起草单位：扬州大学。

本文件主要起草人：张晓君、高晓建、姜群、刘晓丹、朱鑫海、姜姿妍、周一凡。

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DB32/T4727—2024

鳜鱼传染性脾肾坏死病诊断及综合防控

技术规程

1范围

本文件规定了鳜鱼传染性脾肾坏死病的诊断、综合防控和记录。

本文件适用于鳜鱼传染性脾肾坏死病毒的检测以及鳜鱼传染性脾肾坏死病的诊断和综合防控。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB11607渔业水质标准

SC/T7103水生动物产地检疫采样技术规范

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4诊断

4.1现场调查

水质情况包括水源、水色、水温、透明度、pH、亚硝酸盐、氨氮、溶解氧、硬度等；养殖情况包括养殖密度、苗种来源、饵料鱼来源等。

4.2临床诊断

患病鱼表现为沿池边漫游而死，鳃盖、口腔周围、下颌、胸鳍、腹鳍充血，鳃发白，解剖后肝脏呈现白色或有出血点，肾脏和脾脏肿大或有明显的出血点，部分胆囊肿大，部分幽门盲囊出血（见附录A图A.1）。

4.3检测方法

4.3.1试剂材料

试剂材料：

a)无水乙醇（分析纯）；

b)三氯甲烷（分析纯）；

c)异戊醇（分析纯）；

d)1mmol/L乙二胺四乙酸（EDTA），pH8.0；

e)1%十二烷基硫酸钠（SDS）；

f)ddH2O；

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DB32/T4727—2024

g)10mmol/LTris?HCl，pH8.0，4℃保存；

h)Tris饱和酚，4℃保存；

i)8U/μLBstDNA聚合酶，-20℃保存；

j)10mmol/LdNTPs混合物（dATP、dTTP、dCTP、dGTP各2.5mmol/L），-20℃保存；k)10000×SYBRGreenI，-20℃保存；

l)25mmol/LMgCl2，-20℃保存；

m)10×LAMP缓冲液，-20℃保存；

n)5mol/L甜菜碱，-20℃保存；

o)10×PCR缓冲液，-20℃保存；

p)5U/μLTaqDNA聚合酶，-20℃保存；

q)20mg/mL蛋白酶K，-20℃保存；

r)LAMP检测引物序列：

F3：5′?AACCACCAGGCAGAAATGG?3′

B3：5′?ATCCGAGGCGACGTCATC?3′

FIP：5′?TAAAGCCAAAGCCCACATCGGCGAAGACATGGTGCGCTACT?3′

BIP：5′?AAGCAAGTGCACAGCACCCGTCAAGCCTCGCACAGAGG?3′s)巢氏PCR检测引物序列：

MCP?F1：5′?ATGTCTGCAATCTCAGGT?3′

MCP?R1：5′?TTACAGGATAGGGAAGCCTG?3′

MCP?F2：5′?GCGTTTGATGCGATGGAGAC?3′

MCP?R2：5′?ACGGCAGAGACACGGTAGGC?3′

4.3.2仪器设备

仪器设备包括：

a）灭菌锅；

b）水浴锅；

c）PCR仪；

d）紫外分光光度计