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朱鹮肺炎克雷伯菌多重PCR检测技术规程
1范围
本标准规定了朱鹮肺炎克雷伯菌和拟肺炎克雷伯菌的双重PCR检测方法。
本标准适用于朱鹮组织病料和粪便等样品中肺炎克雷伯菌和拟肺炎克雷伯菌的检测。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本标准必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，
仅该日期对应的版本适用于本标准；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本
标准。
GB4789.41食品安全国家标准食品微生物学检验肠杆菌科检验
GB19489实验室生物安全通用要求
SN/T2025动物检疫实验室生物安全操作规范
SN/T2984检验检疫动物病原微生物实验活动生物安全要求细则
3术语、定义和缩略语
下列术语和定义适用于本文件。
术语和定语
3.1.1肺炎克雷伯菌Klebsiellapneumoniaecomplex
肺炎克雷伯菌（Klebsiellapneumoniae）属肠杆菌科克雷伯氏菌属，为革兰氏阴性短杆菌，成双
或短链状排列，无芽胞，无鞭毛，不运动，有明显荚膜，广泛存在于自然界、人和动物的肠道、上呼吸
道，是重要的人畜共患条件性致病菌，可引起肺炎、尿路感染、肝脓肿、败血症等感染性疾病。肺炎克
雷伯菌目前有拟肺炎克雷伯菌(Klebsiellaquasipneumoniae)与肺炎克雷伯菌(Klebsiellapneumonia)
等亚种。
缩略语
下列缩略语应用于本文件。
PCR:聚合酶链式反应（polymerasechainreaction）。
DNA:脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleicacid）。
dNTP:脱氧核苷酸三磷酸（Deoxyribonucleosidetriphosphate）。
4试剂、仪器及材料
PCR仪。
可调移液器：2.5μL、10μL、100μL、1000μL。
恒温培养箱：37℃。
1
电泳仪。
凝胶分析成像系统。
无菌试管：18mm×180mm。
超净台。
冷冻离心机：离心力12000g。
细菌基因组DNA提取试剂盒。
琼脂糖(电泳纯)。
DNA分子量标志物（100-2000bp）。
GelRed或GelGreen核酸染色剂。
琼脂糖(电泳纯)。
6×上样缓冲液:30mmol/LEDTA、36%(体积分数)甘油、0.05%(质量浓度)二甲苯腈蓝FF、
0.05%(质量浓度)溴酚蓝。
50×TAE缓冲液（见附录C）。
Eppendorf管和PCR反应管。
电子天平。
恒温培养箱。
冰箱。
EE肉汤（见附录A）。
PCR扩增引物：见表1。
表1引物
引物名称序列（5’-3）鉴定菌种扩增长度（bp）
WaaQ-FCGGATCCTGGTCATTAAGCTG
肺炎克雷伯菌217
WaaQ-RATTGCATCTTCAGCTGATACCTTT
CpxOKP-FGGCCGGYGAGCGGGGCTCA
拟肺炎克雷伯菌348
CpxDeO-RAGAAGCATCCTGCTGTGCG
5PCR鉴定
2
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