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朱鹮类志贺邻单胞菌分离与鉴定技术规程

1范围

本标准规定了朱鹮类志贺邻单胞菌的分离与鉴定方法。

本标准适用于朱鹮泄殖腔拭子、粪便等样品中类志贺邻单胞菌的分离和鉴定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本标准必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本标准；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本

标准。

GB4789.41食品安全国家标准食品微生物学检验肠杆菌科检验

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

SN/T2123出入境动物检疫实验样品采集、运输和保存规范

SN/T2025动物检疫实验室生物安全操作规范

SN/T2984检验检疫动物病原微生物实验活动生物安全要求细则

3术语和定义

下列术语、定义和缩略语适用于本文件。

术语和定义

3.1.1类志贺邻单胞菌Plesiomonasshigelloides

为革兰氏阴性，能运动，兼性厌氧。是广泛分布在淡水环境中的细菌，被认为是食物中毒和腹泻的

新病原菌。

缩略语

下列缩略语应用于本文件。

PCR:聚合酶链式反应（polymerasechainreaction）

DNA:脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleicacid）

dNTP:脱氧核苷酸三磷酸（Deoxyribonucleosidetriphosphate）

4试剂及材料

4.1灭菌蒸馏水，应符合GB/T6682中一级水的规格。

4.2超净工作台。

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4.3高压灭菌锅。

4.4恒温培养箱，37℃。

4.5高速冷冻离心机。

4.6水平电泳系统。

4.7凝胶成像系统。

4.8普通光学显微镜。

4.9PCR扩增仪。

4.10电子天平。

4.11移液器，2.5μL、10μL、100μL、1000μL。

4.12普通冰箱。

4.13培养皿。

4.14酒精灯。

4.16糖、醇类发酵培养基。

4.15LB固体培养基。

4.1750XTAE电泳缓冲液。

4.186×上样缓冲液:30mmol/LEDTA、36%(体积分数)甘油、0.05%(质量浓度)二甲苯腈蓝FF、

0.05%(质量浓度)溴酚蓝。

4.19酚：氯仿：异戊醇（25:24:1）。

4.20氯仿：异戊醇（24:1）。

5分离与鉴定流程

类志贺邻单胞菌分离与鉴定流程见图1。

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图1类志贺邻单胞菌分离与鉴定流程

6分离纯化

将新鲜朱鹮粪便样本分别分区划线于SS琼脂平板，37℃培养18h-24h，选择无色、圆形、半透明、

表面光滑、湿润小菌落，转接至SS琼脂平板上进行纯化，37℃培养18h-24h用于后续鉴定。

7细菌鉴定

7.1革兰氏染色

参考GB/T18652-2002中2.2.5规定执行。

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7.2生化试验

采用细菌生化鉴定管进行试验，也可利用全自动细菌鉴定仪鉴定。

7.2.1乙酰甲基甲醇（V-P）试验

按SC/T704中表2的规定执行。有气泡产生为阳性：无气泡产生为阴性。

7.2.2氧化酶试验

以毛细管吸取四甲基对二苯胺的1%水溶液滴在细菌的菌落上。菌落呈玫瑰红色、深紫色为阳性，不

变色为阴性。

7.2.3吲哚试验

吲哚（靛基质）试验按SC/T7014表2的规定执行。培养基变红为阳性；不变红为阴性。

7.2.4糖、醇类（葡萄糖、甘露醇）发酵试验

将待检菌穿刺接种于糖、醇类发酵试验培养基（A.2），28℃培养24h后观察。培养基变黄色为阳性，

不变黄色为阴性。