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重组整合缺陷型
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条件
遗传互补性
感染缺陷型
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类型
原核细胞原核细胞原核细胞原核细胞大肠杆菌大肠杆菌
哺乳动物哺乳动物
受体细胞受体细胞受体细胞受体细胞
细胞细胞
真核细胞真核细胞真核细胞真核细胞酵母细胞酵母细胞
昆虫细胞昆虫细胞
1实验背景
pETBlue-2适用于克隆的受体适用于克隆的受体细胞
受体细胞受体细胞
NovaBlueJM109JM109DH5a
lacZ△M15M15
1实验背景
蓝白斑筛选（α-互补））
ω片段（无活性，宿主）
+β-半乳糖苷酶（活性）
α片段（无活性，载体）
++
β-半乳糖苷酶
X-gal半乳糖+5-溴-4-氯靛
深蓝色
X-gal：5-溴-4-氢-3-吲哚-β-D-半乳糖苷半乳糖苷
IPTG：异丙基硫代β-D-半乳糖苷
1实验背景
细菌处于容易吸收外源细菌处于容易吸收外源DNA的状态
细菌表面正电荷增加细菌表面正电荷增加
感受态感受态细胞壁和膜的通透性增加细胞壁和膜的通透性增加细胞壁和膜的通透性增加细胞壁和膜的通透性增加
大肠杆菌感受态摄取大肠杆菌感受态摄取DNA是非选择性的
敏感细胞
1实验背景
转化:大肠杆菌捕获质粒DNADNA的过程
转化发展
F.GriffithM.Mandel
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