植物生理学实验 (4).doc

实验1叶绿素a、b含量的测定（乙醇）（分光光度法）

一、目的

学会Chla、b含量的测定方法，了解叶片中Chla、b的含量。

二、材料用具及仪器药品

菠菜叶片、721分光光度计、天平、研钵、剪刀、容量瓶（25ml）、漏斗、滤纸、乙醇（95%）

三、原理

叶绿素a、b在波长方面的最大吸收峰位于665nm和649nm，同时在该波长时叶绿素a、b的比吸收系数K为已知，我们即可以根据LambertBeer定律，列出浓度C与光密度D之间的关系式：

D665=83.31Ca+18.60Cb…………….(1)

D649=24.54Ca+44.24Cb…………….(2)

(1)(2)式中的D665、D649为叶绿素溶液在波长665nm和649nm时的光密度。

为叶绿素a、b的浓度、单位为每升克数。

82.04、9.27为叶绿素a、b在、在波长665nm时的比吸收系数。

16.75、45.6为叶绿素a、b在、在波长649nm时的比吸收系数。

解方程式(1)(2)，则得：

CA=13.7D665—5.76D649………(3)

CB=25.8D649—7.6D665………(4)

G=CA+CB=6.10D665+20.04D649………(5)

此时，G为总叶绿素浓度，CA、CB为叶绿素a、b浓度，单位为每升毫克，利用上面（3）（4）（5）式，即可以计算叶绿素a、b及总叶绿素的总含量。

四、方法步骤

1．称取0.05克新鲜叶片，剪碎，放在研钵中，加入乙醇1ml共研磨成匀浆，再加5ml乙醇，过滤，最后将滤液用乙醇定容到10ml。

2．取一光径为1cm的比色杯，注入上述的叶绿素乙醇溶液，另加乙醇注入另一同样规格的比色杯中，作为对照，在721分光光度计下分别以665nm和649nm

计算结果：

叶绿素a含量（mg/g.FW）=

叶绿素b含量（mg/g.FW）=

叶绿素总量（mg/g.FW）=

五、实验报告

计算所测植物材料的叶绿素含量。

六、思考题

1、分光光度法与一般比色法有何异同？

2、叶绿素a、b在红光和蓝光区都有一最大吸收峰值，能否用蓝光区的最大吸收波长进行叶绿素a、b的定量分析，为什么？

实验2用CO2排出法测定呼吸强度

一、原理

植物进行呼吸作用，可通过单位时间内所吸收的O2或放出的CO2来测定。本实验是把植物材料置于密闭系统中，用抑制浓度和数量的Ba(OH)2作为植物呼出的CO2吸收基质，然后再用草酸滴定Ba(OH)2的剩余量，其反应如下：

Ba(OH)2＋CO2→BaCO3↓＋H2O…………………（1）

OOC

Ba(OH)2＋（COOH）2→Ba↓+2H2O………………(2)

OOC

同时作一空白对照，二者的差数，即为呼吸作用放出的CO2量。

二、仪器及试剂

（1）大红花（2）广口瓶（3）橡胶瓶塞（带孔、带钩）（4）线（5）小铁钩（6）0.05mol/L氢氧化钡溶液（7）0.05mol/L草酸溶液（8）酚酞指示剂

三、实验步骤

（一）空白实验：准确地称取25毫升0.05mol/LBa(OH)2溶液于广口瓶中，随即塞紧瓶塞，充分摇动几分钟，使瓶内CO2被Ba(OH)2吸收，接着拔去瓶塞上的小橡皮塞，加入1－2滴酚酞指示剂，然后将滴定管插入小孔中，用0.05mol/L（COOH）2滴定致红色刚退为止，记下草酸的消耗量。

（二）呼吸强度的测定：先将瓶盖上小孔用纸帖好，称取大红花1朵，用线扎住，挂于瓶塞钩上，长度适中，而后，装入25毫升0.05mol/LBa(OH)2溶液到广口瓶中，放入大红花，随即塞紧瓶塞，并记录时间，同时摇动瓶子，待40－50分钟后，取出植物材料再盖紧瓶塞，与空白试验同样，分别加入指示剂并用草酸滴定，记下草酸的消耗量。

四、计算

注：A为对照草酸的消耗量ml、B为呼吸瓶草酸的消耗量ml、44为CO2时的摩尔数

W为呼吸的材料重量（g）、T为净呼吸的时间（小时）

实验3不良环境对植物的伤害

一、原理

植物在遭遇到不良环境（如高温、低温等）时，原生质的结构常受到影响，原生质膜的半透性丧失，对物质的透性发生变化，盐类或有机物从细胞中渗出，进入周围环境中。通过电导度的测量和糖的显色反应，可以测知物质的外渗，表明植物受害的程度。

二、仪器及试剂

（1）电导仪（2）电冰箱（4）水浴锅（5）烧杯（6）量筒（7）移液管（8