植物生理学实验 (1).ppt

*五.实验步骤1.称取材料10-15g，装于小篮内，将小篮子固定在橡皮塞上，同时向广口瓶中加0.05mol/LBa(OH)2溶液20ml，立即塞紧瓶塞。实验途中每5min左右轻轻地摇动广口瓶一次，破坏溶液表面的BaCO3薄膜,以利对CO2的吸收。2.另按上述方法(不放材料)作同样测定，作为实验对照。3.30-60min后，小心打开瓶塞，迅速取出小篮子，加入1-2滴酚酞指示剂，立即重新塞紧瓶塞。然后拔出插在滴定管孔口的小橡皮塞，将滴定管插入孔中，用1/44mol/L的H2C2O4滴定，直到红色转变成无色为终点(若30秒钟内溶液又变为红色，可补加1滴H2C2O4,记录滴定所耗用的H2C2O4溶液的体积(ml数)。六实验结果按每消耗1mlH2C2O4溶液相当于1mgCO2计算材料在呼吸放出CO2的mg数。计算公式：呼吸强度(CO2mg/gFw·h)=式中:V0为空白对照所耗用H2C2O4的体积（ml）V1为材料所耗用H2C2O4的体积（ml）M-草酸摩尔浓度ECO2-CO2的摩尔质量七.实验结果分析和讨论1.测定呼吸速率有何意义(V0—V1)M.ECO2W(g)×t(h)下次实验:POD活性测定*实验十二过氧化物酶活性的测定一.实验目的意义掌握分光光度计测定POD的方法和酶活力的表示方法。二.实验原理POD广泛存在植物体中、是呼吸作用过程中一个重要的末端氧化酶，在细胞质中起IAA氧化酶的作用，在植物生长发育的整个过程中，其活性不断发生变化，因此测定POD的活性，可以反映某一时期植物体内代谢的变化。在H2O2存在下，POD催化愈创木酚氧化成茶褐色的产物，生成物在470nm处有最大吸收，通过测定生成物的含量，可计算出POD活力。三.实验材料*四.操作步骤?1.称取植物材料(土豆、小白菜等)0.5g，加0.1mol·L-1tris-HCl缓冲液(PH8.5)5m1，于研钵中研磨成匀浆，于4000rpm下离心15min，倾出上清液(必要时，残渣再用5ml缓冲液提取一次，合并两次上清液)，贮存于冷处(0~5℃)，备用。2.取光径1cm比色杯2只，于1只比色杯加入上述酶液1ml(如酶活性过高可稀释之，土豆约稀释5倍)，再加入反应混合液3ml，立即开启秒表记录时间，另取一只比色杯并加入0.2mol·L-1磷酸缓冲液(PH6.0)校零，于波长470nm测量吸光度，一般测定反应0~3min或0~5min内的光密度值，取其平均值计算。五.结果计算以每min内OD470变化0.01为一个酶活力单位(U)计算POD的活力。计算公式：ΔOD470(A—B)×提取酶液总体积(ml)0.01×W×t×测定用酶液体积(ml)POD活力(U/gFw·min)=六.实验结果分析和讨论1.思考题：POD的一般性质下次实验:可溶性糖含量的测定*实验十三植物组织中可溶性糖含量的测定一.实验目的意义了解糖的测定方法，糖的提取与测定步骤。二.实验原理糖在H2SO4作用下脱水，生成羟甲基呋喃醛，蒽酮在H2SO4作用下生成蒽酚，羟甲基呋喃醛在蒽酚作用下，发生缩合反应，形成绿色络合物，其颜色的深浅与糖含量呈正相关。该实验方法简便，其缺点是没有专一性，因为绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮发生反应，生成绿色络合物。三.实验材料*四.??操作步骤1.糖绘制标准曲线准确称取经80℃烘干的AR葡萄糖100mg，用蒸馏水定容至500ml，即每ml含糖为200ug的标准溶液。将其稀释成一系列0~