植物生理学-9实验九-植物组织逆境伤害程度的测定.ppt

植物组织逆境伤害程度的测定

——电导法主讲：董新纯副教授实验原理植物细胞膜对维持细胞的微环境和正常的代谢起着重要的作用。在正常情况下，细胞膜对物质具有选择透性能力。当植物受到逆境胁迫时，细胞膜遭到破坏，膜透性增大，从而使细胞内的电解质外渗，以致植物组织浸入无离子水中，水的电导将因电解质的外渗而加大。膜透性增大的程度与逆境胁迫强度有关，也与植物抗逆性的强弱有关。电导仪测定外液的电导度增加值，求得伤害程度。实验材料：大叶黄杨叶片方法步骤：1.材料处理：对照：常温低温：－20℃冷冻20～30min注：洗刷试管，去离子水中含有吐温202.取材正常、冻害各取6个叶片，洗净各打取叶圆片36个以上，放到小烧杯中用去离子水冲洗；每支试管12个叶圆片；加入15ml蒸馏水；放入塑料沙网（距液面1-2cm），用去离子水漂洗放置到塑料烧杯中（不盖塞子），统一抽气10～15min。（设置空白1只试管）3.抽气后取出纱网，室温摇动20min（时间可以更长）4.电导仪测定初电导值S15.沸水浴10min（杀死植物组织），自来水冷却，用力摇1-2min后即可测定终电导S2方法步骤：取材各取6个叶片，洗净打叶圆片分装在3支试管中，各加12片、蒸馏水15mL抽气15min平衡20min测量初电导S1煮沸15min冷却、平衡10min测量终电导S2结果计算:相对电导度（L）=(S1-空白）/(S2-空白）冻害的伤害度（％）=Lt－冻害处理的相对电导度Lck－室温对照的相对电导度实验材料空白电导值处理初电导值(μS)终电导值(μS)相对电导度(L)伤害度(%)重复平均重复平均室温－-20℃植物组织逆境伤害程度的测定记载表问题与注意事项：1.蒸馏水中加吐温，洗仪器时出现泡沫。吐温作用：阴离子表面活性剂，促进水分与叶片表面接触。吐温20－聚氧乙烯（20）山梨醇酐单月桂酸酯2.抽气作用？3.纱网作用?4.温度对电导度的影响较大，S1、S2须在相同的温度下测定。5.防止高CO2气源和口中呼出的CO2进入试管抽出细胞间隙的气体，使水分更容易、更充分地渗入到细胞间隙中去。防止抽气时叶圆片被抽出。DDS-307型电导率仪操作规程1、打开电源开关，预热30分钟。2、仪器校准：将“选择”旋钮指向“检查”档，调节常数补偿旋钮到“1”刻度线，调节温度补偿旋钮到“25”刻度线，然后调节“校准”旋钮，使仪器显示100.0μS/cm，校正完毕。按照电极上标明的电极常数，调节常数补偿旋钮，使仪器显示值与电极所标常数一致。DDS-307型电导率仪操作规程3、样品测定：将“选择”旋钮置于适合的量程位置。当测定过程中显示值熄灭时，说明测量值超出量程范围，此时应将选择旋钮置于高一挡量程。测定时电极完全浸没到溶液中。（如果试管口小，电极不能全部浸没时，可以全部加去离子水至20ml。）测定一个样品后用去离子水冲洗后，再用滤纸将电极表面的水份洗干后测定下一个样品。