《植物生理学实验》实验03-叶绿素含量的测定.pptx

;;;;;;;吸收系数(?)的物理意义:吸光物质在单位浓度、单位液层厚度时的吸光度

;吸光度的加和性：

如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和

即：OD=OD1+OD2+……+ODn;;;如果我们在645nm或663处用分光光度计检测得到溶液OD值（测量数据，已知数据），根据吸光度的加和性，我们可得到

OD663=OD663叶绿素a+OD663叶绿素b

OD645=OD645叶绿素a+OD645叶绿素b

;;;;;;测定吸光值;计算;;;2．分光光度法和比色法有何异同?

（1）不同点

①原理不同

分光光度法的原理基于朗伯一比尔（Lambert-Beer）定律，在分光光度计中，将不同波长的光连续地照射到一定浓度的样品溶液时，便可得到与不同波长相对应的吸收强度。利用该曲线进行物质定性、定量的分析方法。

比色法的原理是基于被测物质溶液的颜色或加入显色剂后生成的有色溶液的颜色，颜色深度和物质含量成正比，则根据光被有色溶液吸收的强度，即可测定溶液中物质的含量。

②特点不同

分光光度法具有灵敏度高、操作简便、快速等优点，是生物化学实验中最常用的实验方法。而比色法以生成有色化合物的显色反应为基础，针对性强，使用条件较为严格：反应应具有较高的灵敏度和选择性，反应生成的有色化合物的组成恒定且较稳定，它和显色剂的颜色差别较大。

③历史发展不同

比色法的历史比分光光度法悠久。早在公元初古希腊人就曾用五倍子溶液测定醋中的铁，1795年，俄国人也用五倍子的酒精溶液测定矿泉水中的铁。比色法作为一种定量分析的方法，大约开始于19世纪30～40年代。而分光光度法是现代社会普遍使用的一种测定物质含量的方法。

随着光学仪器制造技术的发展，紫外－可见分光光度计应用日益普及，精密度较高而价格又较低的紫外－可见分光光度计已逐渐代替光电比色计，分光光度法也随之逐渐代替了比色法。

（2）相同点

两个方法均是用来进行物质含量测定地点定性、定量方法；均需要一定的条件和设备。;

3.叶绿素a和叶绿素b在红光区和蓝光区都有最大吸收峰，能否用蓝光区的最大吸收峰波长进行叶绿素a和叶绿素b的定量分析，为什么?

可以。因为只要将类萝卜素的吸光值也考虑进来就可以通过测量计个峰值的吸光度来计算叶绿素a、b、类胡萝卜素的含量。但是此方法类胡萝卜素要考虑进来，干扰太多，比较复杂，不建议