《植物生理学实验》实验05-根系活力的测定.pptx

植物生理学实验2019-2020学年春季学期红河学院生命科学与技术学院陶宏征

实验五根系活力的测定

实验目的掌握TTC法测定根系活力的原理和方法

实验原理根系活力TTC法测定根系活力的原理

根系活力H2O无机盐合成氨基酸和植物激素（ABA、CTK、GA等）根系活力泛指跟的吸收与合成的能力，是衡量根系活动能力强弱的重要指标，可以衡量根系吸收水分或矿质元素的能力大小，甚至可以反映地上部分的营养状况以及产量水平。测定根系活力，可为植物营养研究提供依据。在幼根中，脱氢酶活性的强弱与根系活力成正比。所以，通过测定脱氢酶的活性，可由脱氢酶活性代表根系活力。

TTC法测定根系活力的原理氯化三苯基四氮唑（TTC）是氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但可以被根系细胞内的琥珀酸脱氢酶等还原，生成红色而不溶于水的三苯基甲腙（TTF）。生成的红色TTF越多，说明酶活性越强，也表示根系活力越强TTC被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸，延胡索酸，苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。所以TTC还原量能表示脱氢酶活性并作为根系活力的指标

实验用品材料：植物根系仪器：分光光度计、恒温箱、容量瓶、烧杯、石英砂、研钵、量筒、三角烧瓶、刻度试管试剂：乙酸乙酯，次硫酸钠（Na2S2O4，强还原剂，俗称保险粉），1%TTC、0.4%TTC和1mg/ml的TTC溶液(准确称取TTC1g，溶于少量水中，定容至1000mL)，1mol／L硫酸(用量筒取98％浓硫酸55mL，边搅拌边加入到盛有500mL蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1000mL)，0.4mol／L琥珀酸(称取琥珀酸4.72g，溶于水中，定容至100mL)，66mmol／L磷酸缓冲液(pH7.0，A液：称取Na2HPO4·2H2O11.876g溶于蒸馏水中，定容至1000mL；B液：称取KH2PO49.078g溶于蒸馏水中，定容至l000mL。用时取A液60mL，B液40mL混合即可)

实验步骤定性测定定量测定

定性测定配置反应液把1%TTC溶液，0.4moL/L琥珀酸钠和磷酸缓冲液按1︰5︰4比例混合。把根仔细洗净，把地上部分从茎基切除，将根放入三角瓶中，倒入反应液，以浸没根为度，置37℃左右暗处放1h，以观察着色情况，新根尖端几毫米以及细侧根都明显地变成红色，表明该处有脱氢酶存在。

定量测定TTC标准曲线的制作取1mg/mL(即1%)的TTC2mL于100mL容量瓶中，加入2gNa2S2O4摇匀，加入乙酸乙酯40mL左右剧烈震荡至充分溶解，用乙酸乙酯定容至刻度，即成TTF标准液(20μg/mL)。按下表制作TTF标准曲线。以空白作参比，在485nm波长下测定光密度，绘制标准曲线，求出回归方程试管编号123456空白样品TTF溶液浓度（ug/mL）0246810溶液中的TTC还原量（ug）020406080100量取TTF标准液的体积(ml)012345量取的乙酸乙酯（ml）1098765试管溶液总体积（10mL）101010101010OD(485nm)

样品的提取及测定及根系活力测定

计算根系活力TTC还原强度（mg/g(根鲜重)/h）TTD还原量（mg）[根重（g）×时间(h)]＝根系活力（以TTC还原强度表示）＝

注意事项根系应该吸干水分但不能用力挤压伤及细胞，才能准确测量

思考题加入磷酸缓冲液的作用？确保酶活性加入硫酸的作用？终止实验加入乙酸乙酯作用？溶解TTF