高效液相色谱法定性定量分析.ppt

高效液相色谱法定性定量分析;提纲;一、HPLC系统;HPLC示意图;输液泵：

输液泵是HPLC系统中的重要部件之一，

泵的性能好坏直接影响到整个系统的质量和

分析结果的可靠性。

泵应具有的性质：

流量稳定；

流量范围宽；

输出压力高；

液缸容积小；

密封性能好，耐腐蚀。;操作时的注意事项：

防止任何固体微粒进入泵；

流动相不含有任何腐蚀性物质；

工作时要注意溶剂瓶中的溶剂用完；

泵的工作压力不能大于规定的最大压力；

流动相要先进行脱气，防止产生气泡。;进样器：

目前采用较多的是六通

进样阀和自动进样器。

对进样装置的要求：

密封性好，死体积小，

重复性好，保证中心进样，

进样时对色谱系统的压力、

流量影响小。

进样方式可分为：

隔膜进样、停流进样、阀进

样、自动进样。目前应用做多的

是阀进样和自动进样。;色谱柱;检测器;数据记录及处理;HPLC的固定相和流动相;固定相的种类：

硅胶

氧化铝

聚合物

固定相的选择：（+++表示好，++表示一般，+表示差）;流动相：

一个理想的流动相溶剂应具有低粘度、与检测其兼容性好、易于得到纯品和低毒性的特征。

选择流动相要考虑的因素：

1.流动相应不改变填料的任何性质；

2.纯度；

3.必须与检测其匹配；

4.粘度要低；

5.对样品的溶解度要适宜；

6.样品易于回收。;常用的液相色谱定性方法有：

泵的性能好坏直接影响到整个系统的质量和

外标法是以待测组分纯品配制标准试样和待测试样同时作色谱分析来进行比较而定量的，可分为标准曲线法和直接比较法。

它是将已知量的参比物（内标物）加到已知量的试样中．那么试样中参比物的浓度为已知；

对于某些有特殊紫外谱图的化合物，也可以通过对照标准谱图的方法来识别化合物。

密封性好，死体积小，

由于每一种化合物在特定的色谱条件下（流动相组成、色谱柱、桂温等相同），其保留值具有特征性，因此可以利用保留值进行定性。

目前采用较多的是六通

一个理想的流动相溶剂应具有低粘度、与检测其兼容性好、易于得到纯品和低毒性的特征。

密封性好，死体积小，

对于一般的分析只需5000塔板数的柱效;对于同系物分析，只要500即可;对于较难的分离物质对则可采用高达2万的柱子，因此一般10～30CM左右的柱长就能满足复杂混合物分析的需要。

检测器是HPLC系统的三大关键部件之一，作用是把洗脱液中的组分的量转化为电信号。

密封性好，死体积小，

归一化法要求所有组分都能分离并有响应。

2．利用检测器的选择性定性

选择流动相要考虑的因素：

对样品的溶解度要适宜；

工作时要注意溶剂瓶中的溶剂用完；

紫外检测器是液相色谱中使用最广泛的一种检测器。

再取可能的标准样品按同样方法处理。

目前采用较多的是六通

固定相的选择：（+++表示好，++表示一般，+表示差）

它是将已知量的参比物（内标物）加到已知量的试样中．那么试样中参比物的浓度为已知；

工作时要注意溶剂瓶中的溶剂用完；

对比两者光谱图即能鉴别出该组分与标准样品是否相同。

有机聚合物刚性小、易被压缩，溶剂或溶质容易渗入有机基质中，导致填料颗粒膨胀，结果减少传质，最终使柱效降低。

3．利用紫外检测器全波长扫描功能定性

对于一般的分析只需5000塔板数的柱效;对于同系物分析，只要500即可;对于较难的分离物质对则可采用高达2万的柱子，因此一般10～30CM左右的柱长就能满足复杂混合物分析的需要。

对比两者光谱图即能鉴别出该组分与标准样品是否相同。

它是将已知量的参比物（内标物）加到已知量的试样中．那么试样中参比物的浓度为已知；;定性分析;;;定量分析;