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高效液相色谱法的分离实验

一、实验目的

1、了解高效液相色谱仪的结构。

2、掌握高效液相色谱仪的基本操作方法和主要实验条件的选择。

3、掌握液相色谱定性定量分析技术。

二、实验原理

在互不相溶的两相——流动相和固定相的体系中，当两相作相对运动时，第三组分（即溶质或吸附质）连续不断地在两相之间进行分配，这种分配过程即为色谱过程。由于流动相、固定相以及溶质混合物性质的不同，在色谱过程中溶质混合物中的各组分表现出不同的色谱行为，从而使各组分彼此相互分离，这就是色谱分析法的实质。

试剂瓶中的流动相被泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动，经过反复多次的吸附—解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪。

三、仪器和试剂

ThermoFisherUltimate3000高效液相色谱仪、紫外检测器、C18柱、100mL容量瓶、10mL移液管、2.5mL一次性注射器、针头过滤器、100μL微量进样器、甲醇（色谱纯）、超纯水、100mg/L苯酚液、待测苯酚样品溶液。

四、实验步骤

1、标准溶液的配制。

依次量取5、10、20、50、75mL苯酚储备液于100mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，即标准溶液浓度分别为5、10、20、50、75mg/L。

2、开机。

3、选择实验条件。

色谱柱：C18柱；???流动相速度：1ml/min；?

进样量：10μL；?????柱温：30℃。

紫外检测器波长:270nm。

4、操作方法。

过滤、洗针、进样、显示流出曲线。

五、数据处理

1、绘制色谱流出曲线图，建立回归方程。

浓度

5

10

20

50

75

待测样品

待测样品

峰面积

3.8515

6.9765

14.3253

35.7020

52.5839

28.2377

28.2317

浓度（mg/L）

浓度（mg/L）

2.计算待测样品中苯酚含量

待测样品峰面积平均值=（28.2377+28.2317）/2=28.2347

代入方程得浓度=40.6230mg/L