高效液相色谱法(共34张PPT).pptx

高效液相色谱法一、HPLC与经典LC区别主要区别：固定相差别，输液设备和检测手段1．经典LC：仅做为一种分离手段柱内径1~3cm，固定相粒径100μm且不均匀常压输送流动相柱效低（H↑，n↓）分析周期长无法在线检测2．HPLC：分离和分析柱内径2~6mm，固定相粒径10μm（球形，匀浆装柱）高压输送流动相柱效高（H↓，n↑）分析时间大大缩短可以在线检测二、HPLC与GC差别相同：兼具分离和分析功能，均可以在线检测主要差别：分析对象的差别和流动相的差别1．分析对象GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品，高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚物的样品不可检测占有机物的20%HPLC：溶解后能制成溶液的样品，不受样品挥发性和热稳定性的限制分子量大、难气化、热稳定性差及高分子和离子型样品均可检测用途广泛，占有机物的80%pH=3~7弱酸；硅胶含水量17%分配色谱硅胶失活→载体例：水+甲醇，乙腈，THF4．影响k的因素：与固定相性质和流动相性质有关特点：峰易拖尾缺点：系统内部压力大，易流失，不实用（2）高分子多孔小球：YSG例：水+甲醇，乙腈，THF选室温250C左右二、液液分配色谱法（LLC）pH=3~7弱酸；1．反相离子对色谱法固定相与装柱方法的选择：GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品，堆积硅珠YQG3~4μm8×108理想三、高效液相色谱仪流程图续前2．流动相差别GC：流动相为惰性气体组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用HPLC：流动相为液体流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、改善分离度增加了因素，对分离起很大作用流动相种类较多，选择余地广流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相可以增大分离选择性3．操作条件差别GC：加温操作HPLC：室温；高压（液体粘度大，峰展宽小）1．贮液罐（滤棒，可滤去颗粒状物质）2．高压泵（输液泵）3．进样装置4．色谱柱——分离5．检测器——分析6．废液出口或组分收集器7．记录装置三、高效液相色谱仪流程图续前四、HPLC的特点和应用“三高”“一快”“一广”高柱效——n=104片/米，柱效高（远高于一般LC）高灵敏度高选择性分析速度快应用范围广泛（可分析80%有机化合物）热力学理论：塔板理论——平衡理论基础动力学理论：速率理论——Vander方程第二节基本理论和条件选择一、塔板理论二、速率理论三、HPLC法中分离条件的选择一、塔板理论二、速率理论（与GC对比）1.续前2.讨论：1）流动相流速对HPLC板高的影响（与GC对比）next2）涡流扩散项及其影响next图示back续前3）传质阻抗项及其影响柱效评价：色谱系统适应性试验3）适用：极弱酸碱物质用途广泛，占有机物的80%k↓，组分tR↓3）示差折光检测器：利用折光率的差别用途广泛，占有机物的80%流动相及其流速的选择：3）适用：较强的有机酸、碱堆积硅珠YQG3~4μm8×108理想主要区别：固定相差别，输液设备和检测手段GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品，适用：分离弱极性化合物1．反相离子对色谱法（IPC或PIC）三、化学键合相色谱法（BPC）三、HPLC法中分离条件的选择3）适用：极弱酸碱物质图示三、HPLC法中分离条件的选择1.固定相与装柱方法的选择：选粒径小的、分布均匀的球形固定相（dp≤10μm）首选化学键合相，匀浆法装柱2.流动相及其流速的选择：选粘度小、低流速的流动相——甲醇，1ml/min3.柱温的选择：选室温250C左右第三节各类高效液相色谱法一、液固吸附色谱法（LSC）二、液液分配色谱法（LLC）三、化学键合相色谱法（BPC）一、液固吸附色谱法（LSC）流动相为液体，固定相为固体吸附剂1．分离机制：利用溶质分子占据固定相表面吸附活性中心能力的差异分离前提：K不等或k不等续前（1）硅胶表孔硅胶（薄壳硅胶）全多孔硅胶无定形YWG5~6μm5×104球形YQG3~4μm8×108堆积硅珠YQG3~4μm8×108理想原理：吸附特点：峰易拖尾适用：分离极性化合物2．固定相：与LC比，固定相粒径不同（10μm）（2）高分子多孔小球：YSG原理：吸附+分配蒹小孔凝胶作用特点：柱选择性好，峰形好，柱效低适用：分离弱极性化合物续前3．流动相：底剂（烷烃）+有机极性调节剂例：正己烷或庚烷+氯仿---