《仪器分析》高效液相色谱法.ppt

超声脱气进样操作：

load时，注入样品

扳至Inject

约1min后，扳回load，拔针梯度洗脱的特点?改善分离,加快分析速度；?改善峰形,减少拖尾;?基线漂移、重现性差。适用于组分多，极性范围宽的复杂样品二、进样系统六通阀Load状态注入样品液Inject状态三、分离系统色谱柱是高效液相色谱仪的重要部件，由柱管和固定相组成按主要用途可分为分析型色谱柱和制备型色谱柱；四、检测系统高效液相色谱仪中的检测器是通过将组分的量转变成为电信号；检测器应具备灵敏度高、响应对流动相流量及温度变化都不敏感、死体积小、线性范围宽、适用范围广、重现性好的特点。四、检测系统常用的检测器有紫外吸收检测器（UVD）蒸发光散射检测器（ELSD）示差折光检测器（RID）荧光检测器（FLD）电导检测器（ECD）质谱检测器（MSD）紫外吸收检测器（UVD）紫外检测器是使用最广泛的一种检测器特点：灵敏度较高，噪声低，检出限小，适合分析有紫外吸收的物质；为浓度型检测器；选择性检测器，仅对有紫外吸收的物质有响应；可用于制备，或与其它检测器串联使用；对温度和流动相流量波动不敏感，可用于梯度洗脱。紫外吸收检测器（UVD）UVD有三种类型：固定波长型、可变波长型及二极管阵列检测器。目前使用最多的是可变波长型及二极管阵列检测器。图10-8流通池示意图可变波长型紫外检测器可变波长型紫外检测器是目前高效液相色谱仪中配置最多的检测器，采用氘灯作光源，波长在190～600nm范围内可连续调节。其结构与一般的紫外分光光度计一致，主要差别是用流通池代替吸收池。二极管阵列检测器三维色谱-光谱图（二）蒸发光散射检测器（ELSD）ELSD一般都是由三部分组成，即雾化器、加热漂移管和光散射池主要用于糖类、高分子化合物、高级脂肪酸以及甾体类等几十类化合物（三）示差折光检测器（RID）特点：通用性强，适用于具有与流动相折射率不同的样品组分，但是灵敏度低，也不能用于梯度洗脱。通常只用于糖类化合物的检测。（四）荧光检测器（FLD）特点:灵敏度高，检测限可达到10-10g·ml-1，选择性好，样品用量少应用：具有荧光的有机化合物（如多环芳烃、氨基酸、胺类、维生素和某些蛋白质等），都可用荧光检测法检测。（五）电导检测器（ECD）电导检测器是根据电化学原理和物质的电化学性质进行检测的特点:灵敏度高、专属性高应用:主要应用于复杂样品中痕量组分的选择测定，亦即较复杂生物样品中药物和其代谢物的测定(六)质谱（MS）质谱将化合物打碎成离子和碎片离子，按其质荷比的不同进行分离测定。质谱是强有力的结构解析工具之一，它的应用范围广、灵敏度高、分析速度快，但仪器和实验成本很高，在一般性的实验中不太适宜。§10-2高效液相色谱的类型一、液固吸附色谱二、液-液分配色谱三、化学键合相色谱四、离子交换色谱五、凝胶色谱法（一）正相键合相色谱法（NBPC）（二）反相键合相色谱法（RBPC）一、液-固吸附色谱流动相为液体，固定相为固体吸附剂1、基本原理：利用各组分吸附能力的差异而分离的；吸附能力大的组分，分配系数大，保留值就大（后出峰）。2、固定相：极性固定相：硅胶、氧化铝、氧化镁、分子筛；非极性固定相：活性炭较常使用的是5～10μm的全多孔型硅胶吸附剂。以极性吸附剂为固定相时，组分的极性越大，保留值就越大。不同类型的有机物在极性吸附剂上的保留时间如下：氟碳化合物饱和烃烯烃芳烃有机卤化物醚硝基化合物腈酯、醛、酮醇羧酸硅胶固定相分离苯，甲苯，乙苯，丙苯，丁苯流动相：干燥正庚烷1份水饱和的正庚烷2份干燥正庚烷水饱和的正庚烷流动相影响分离的选择性3、流动相（也称洗脱液）：极性大的样品用极性大的流动相，极性小的样品用极性小的流动相；4、应用?具有不同官能团的化合物?油溶性试样?同分异构体思考：（邻、间、对）硝基苯胺的三种异构体极性大小？邻位间位对位邻硝基苯胺间硝基苯胺对硝基苯胺适合分离的物质（二）液-液分配色谱固定相与流动相均为液体（互不相溶）；1、基本原理：利用组分在固定相和流动相上的溶解度不同而分离；分配系数大，保留值就大。2、固定相：将固定液涂于载体，易流失，较少采用；固定相极性-流动相非极性反相分配色谱正相分配色谱分离极性物质固定相非极性-流动相极性分离芳烃、烷烃等弱极性物质3、按固定相与流动