(完整版)动物免疫抗体血清学检测技术.pptVIP

动物疫病免疫抗体

血清学检测方法2019.5.10

内容一、血清学检测的意义二、血清学检测内容和方法三、血凝和血凝抑制实验四、酶联免疫吸附实验五、虎红平板凝集实验（初筛）

一、血清学检测的意义动物免疫接种已经成为目前防御疫病传播的首选措施，只有给动物进行有效的免疫接种后，才能产生一定的保护力，从而防止疫病的侵入和蔓延。因此在群体接种疫苗前后对抗体水平进行检测，准确了解动物疫病发生、传播和流行情况，掌握畜禽免疫抗体水平和动物疫病保护情况，从而更有效地采取综合防控措施。因此，做好动物免疫抗体检测工作有着十分重要的临床意义和经济意义。

重要性有效预防动物疫情的发生动物疫情普遍存在传染性，容易扩散，当发生动物疫情时，动物免疫抗体的监测，能够让我们了解疫情发展的情况，能够对控制疫情起到积极作用有效判断动物疫情发生的原因动物免疫抗体监测，能够为疫情发生时提供有效的数据，在第一时间找到疫情原因，有针对性的做出疫情控制。有效推动动物免疫程序的制定动物免疫抗体检测能够提供科学依据，让兽医技术人员有效的根据监测数据制定出免疫程序，有效的预防动物疫情，从而降低养殖户的经济损失

二、血清学检测内容和方法猪猪瘟O型口蹄疫A型口蹄疫牛O型口蹄疫A型口蹄疫羊O型口蹄疫小反刍兽疫禽禽流感新城疫检测内容

检测方法禽流感：（H5+H7）三价灭活疫苗（H5N1Re-8株+H7N9H7-Re1株）——2019鸡新城疫血凝与血凝抑制实验猪瘟O型口蹄疫A型口蹄疫地方病：蓝耳、细小、圆环、伪狂犬、乙脑小反刍兽疫酶联免疫吸附实验ELISA布病虎红平板凝集实验（初筛）

血凝试验：某种病毒的血凝素，能使鸡、鹅或人的红细胞发生凝集，叫做血凝试验，也称直接血凝反应，利用这种特性设计的试验称血凝试验(HA)。常见于正粘病毒（禽流感）、副粘病毒（新城疫）和某些黄病毒、痘病毒等。目的：测定病毒的血凝效价，通常采用4个血凝单位用已知抗原来检测被检血清中有无相应的特异性抗体和滴定该特异性抗体的水平。三、血凝与血凝抑制实验（禽流感和鸡新城疫）血凝素（HA）柱状

刺突：亚型特异性抗原，易变异血凝素（HA，从H1—H15):呈柱状功能：①吸附细胞：与细胞上受体结合,使病毒侵入细胞②凝集多种动物的红细胞（血凝试验）③具抗原性：其抗体能中和病毒---中和抗体抑制血凝（血凝抑制试验）血凝素（HA）柱状

血凝试验（HA)原理：

血凝抑制试验：当病毒的悬液中先加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或其血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制反应，也称血凝抑制反应，利用这种特性设计的试验称血凝抑制试验(HI)。该试验是目前WHO进行全球流感监测所普遍采用的试验方法。目的：检测有无病毒感染和免疫状态。

血凝抑制试验（HI）原理病毒的悬液中加入特异性抗体，红细胞的凝集现象被抑制，称为红细胞的血凝抑制。？++

主要实验器材：微量移液器○普通离心机微量振荡器禽用采血器96孔V型血凝反应板

试验主要试剂：标准抗原、阳性血清、阴性血清与待检血清1%鸡红细胞悬液（阿氏液）生理盐水（PBS液）四单位抗原

阿氏（Alsevers）液配制称量葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.42g，加蒸馏水至100mL，散热溶解后调pH值至6.1，69kPa15min高压灭菌，4℃保存备用。

1%红细胞的配制1.准备好试验所需的所有材料，包括离心管、低速离心机、试管架、PBS缓冲液（生理盐水）、注射器、100ml大青瓶及塞子等等。2.抗凝血第一次离心。用注射器采集若干毫升抗凝鸡（鸭）血，根据需要确定。将抗凝血缓慢注入离心管内，盖好盖子后将离心管放入离心机，配平后1500r/min离心5min，离出抗凝剂及血浆等。

1%红细胞的配制3.第一次离心结束后，将上层液体及白细胞层用注射器吸出，加入适量PBS缓冲液，配平后进行第二次离心，1500r/min离心5min，进一步清洗红细胞。4.第二次离心结束后，同样吸出上层液体及白细胞层，再加入适量PBS缓冲液，配平后进行第三次离心，2000r/min离心10min，进一步清洗红细胞。5.离心结束，最后一次吸出上层清液。量取99mlPBS缓冲液加入100ml大青瓶（或其他容器），用注射器（或其他，如吸管）吸取1ml洗净的红细胞，缓慢加入99mlPBS缓冲液中，塞紧瓶塞。注意：在加红细胞过程中还须不断轻摇以确保红细胞均匀，使其每孔加入相同数量的红细胞。制备好的红细胞液如果放置后上清液变红，说明有溶血，不可再使用。

倒加血凝试验操作步骤

结果判定