血清 25-羟基维生素 D2和 D3的检测同位素稀释液相色谱串联质谱法2024.pdfVIP

WS/T478—2024

血清25-羟基维生素D和D的检测23

同位素稀释液相色谱串联质谱法

1范围

本标准规定了血清25-羟基维生素D和25-羟基维生素D检测的常规方法-同位素稀释液相色谱串23

联质谱法的技术要求，包括试剂配制、样品制备、仪器检测、数据分析等内容。

本标准适用于医疗机构临床实验室利用同位素稀释液相色谱串联质谱法检测血清25-羟基维生素D2

和25-羟基维生素D。3

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本标准必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本标准；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本

标准。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。

3术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

3.1

内标internalstandard

在定量分析时，加入到样品中作为参比物的已知量的化合物纯品。

3.2

检出限limitofdetection

检测方法在规定的实验条件下所能检出分析物的最低浓度。

3.3

定量检测下限lowerlimitofmeasuringinterval

在满足实验室对准确性和精密度要求的前提下，检测方法在规定的实验条件下所能准确定量检测分

析物的最低可测量浓度或量。

3.4

线性linearity

在给定的测量范围内，使测定结果与样品中分析物的量直接成比例的能力。此处的测定结果指

最终的分析结果，而非仪器输岀的原始信号。

[来源：WS/T408—2012,定义2.2]

3.5

线性范围linearrange

使实验系统的最终分析结果为可接受的线性的浓度范围，此时非线性误差应低于允许误差。

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WS/T478—2024

[来源：WS/T408—2012,定义2.3]

3.6

基质效应matrixeffect

标本中除分析物之外的样品性质对分析物测定结果的影响。

4符号与缩略语

下列符号与缩略语适用于本标准。

25(OH)VD：25-羟基维生素D(25-HydroxyvitaminD)222

25(OH)VD：25-羟基维生素D(25-HydroxyvitaminD)333

BSA：牛血清白蛋白(bovineserumalbumin)

CV：变异系数(coefficientofvariation)

LOD：检出限(limitofdetection)

LLMI：定量检测下限(lowerlimitofmeasuringinterval)

MRM：多反应监测(multiplereactionmonitor)

S/N：信噪比(signaltonoiseratio)

5检测原理和方法

本标准建立的25(OH)VD和25(OH)VD检测方法以同位素稀释液相色谱串联质谱法为检测原理。方23

法是以稳定同位素标记的25(OH)VD和25(OH)VD为内标添加至血清中，内标与血清均匀混合后，通过23

加入碳酸盐缓冲溶液释放出与蛋白结合的25(OH)VD和25(OH)VD，加入正己烷-乙酸乙酯混合溶液将其23

从血清当中萃取出来，将萃取液用氮气吹干，用流动相初始比例溶液进行复溶。利用液相色谱串联质谱

分离并检测血清25(OH)VD、25(OH)VD和内标特异的离子对。通过建立的标准品工作曲线以25(OH)VD、

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25(OH)VD与各自内标峰面积比计算血清25(OH)VD和25(OH)VD浓度。