实时荧光聚合酶链反应临床实验室应用指南2024.pdfVIP

WS/T230—2024

实时荧光聚合酶链反应临床实验室应用指南

1范围

本标准规定了实时荧光聚合酶链反应在临床实验室应用中的样本采集和处理、方法、污染预防和控

制、质量管理、结果判读和报告、实验室生物安全、临床适用范围等要求。

本标准适用于全国各级各类医疗卫生机构及医学检验实验室开展核酸扩增基因定性及定量检测。

本标准不适用于基于核酸杂交、核酸恒温扩增、基因测序等技术所开展的检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本标准必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本标准；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本

标准。

GB/T37874核酸提取纯化方法评价通则

GB/T40974核酸样本质量评价方法

JJF1874（自动）核酸提取仪校准规范

JJF1527聚合酶链反应分析仪校准规范

WS233病原微生物实验室生物安全通用准则

WS/T348尿液标本的采集与处理

WS/T414室间质量评价不合格原因分析

WS/T640临床微生物学检验标本的采集和转运

WS/T661静脉血液标本采集指南

3术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

聚合酶链反应polymerasechainreaction;PCR

一种利用人工合成的寡核苷酸作为引物介导的DNA目标序列特异性酶促扩增技术。当存在模板、底

物、引物和耐热DNA聚合酶时，通过调节反应温度引导多次“变性-退火-延伸”反应循环，可令痕量DNA

模板扩增数百万倍。

实时荧光聚合酶链反应real-timefluorescencepolymerasechainreaction;real-timePCR

在PCR反应体系中引入荧光基团，利用荧光信号的积累实时监测整个PCR进程，通过连续监测绘制

反应动力曲线，从而对样本中被扩增模板DNA的初始含量进行计算。该技术包含定性和定量检测，常以

qPCR（quantitativepolymerasechainreaction）代表定量检测。

反转录reversetranscription;RT

以RNA单链为模板，在反转录酶催化下合成互补DNA（即cDNA）的过程。

模板template

复制或转录、反转录过程中用来产生互补链的DNA或RNA核苷酸序列。

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WS/T230—2024

目标序列targetsequence

拟通过PCR技术进行定性或定量检测的特定核酸序列区域。

引物primer

具有特定序列的人工合成寡核苷酸片段，可与目标序列区域上下游互补，从而形成稳定的氢键连接，

促进DNA聚合酶的结合和DNA链的延伸。

荧光探针fluorescentprobe

根据特定基因序列设计的标记有荧光基团和淬灭基团的人工合成寡核苷酸片段，与互补序列退火杂

交后，通过PCR扩增酶促反应释放荧光信号，用于检测样本中是否含有特定基因序列。

变性denaturation

PCR反应体系中，利用高温条件破坏核酸二级结构中的氢键，使DNA与RNA均从复杂高级结构转变为

线性单链核苷酸的过程。

退火annealing

PCR反应体系中，需通过降低反应体系温度，使两条线性单链核苷酸通过互补碱基间的氢键形成局

部双链的过程。

延伸extension

PCR反应体系中，引物与模板发生退火后，在耐热DNA聚合酶作用下，根据模板DNA的碱基顺序，以

单个核苷酸为原料，自引物5’端向3’端逐个添加核苷酸合成两条互补链的过程。

DNA聚合酶DNApolymerase

以DNA单链为模板、dNTP为原料，催化脱氧核苷酸加到引物或DNA链的3′-OH端，合成互补DNA新链

所需的酶。

反转录酶reversetranscriptase