胶体金技术-讲座.pptVIP

胶体金免疫层析技术

（colloidalgoldimmunochromatographyassay,GICA）目录一、免疫胶体金技术的发展历史及应用二、胶体金检测卡的基本原理及构造三、免疫胶体金层析法检测原理及应用四、?-激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍五、常见问题分析与注意事项六、瘦肉精检测卡性能指标检测（以CLE为例）一、免疫胶体金技术的发展历史

及应用1.1939年（英，植物）Kausche和Ruska把烟草叶病毒吸附在金颗粒上，在电子显微镜下观察呈现高电子密度的细状颗粒，开启了免疫胶体金技术的研究。2.1971年（美，微生物）Faulk和Taylor首先将兔抗沙门菌抗血清与胶体金颗粒结合，用直于检测沙门菌的表面抗原。3.1974年（奥）Romano等将胶体金标记在马抗人IgG上，实现了间接免疫金染色法。同年Bauer等报道将胶体金标记在凝集素上的应用。4.1978年Geoghegan等应用免疫金技术检测B淋巴细胞表面抗原。5.1981年Danscher建立了银显影液增强光镜下金颗粒的免疫金银染色方法（Immunogold-silverstaining,IGSS）。6.1986年Fritz（美，生物）等人在IGSS法基础上成功地进行了彩色IGSS的染色法,使得检测结果更加鲜艳夺目—这是免疫金检测技术诞生的一次历程碑！二、胶体金检测卡的基本原理及构造胶体金（colloidalgold）也称金溶胶（goldsol），是金盐被还原成原子金后形成的金颗粒悬液。胶体金试纸条的构造三、免疫胶体金层析法检测原理及应用GICA有三种反应模式：夹心法，间接法，竞争抑制法。夹心法反应原理首先将已知的特异性抗体（单抗或多抗）以一定的量包被于膜上作为检测线，可与金标物结合的二抗作为质控线，与包被抗体相配对的另一单抗则标记于金标垫上。检测时，如标本中有待测抗原，待检抗原与金标记单抗结合并上行至检测线，再与检测线上特异性抗体结合，最终形成肉眼可见的红色条带（金颗粒－抗体－抗原－包被抗体），如样本中无待检抗原，则不能形成肉眼可见的红色条带。无论样本中是否含有待检物质，质控线都会呈现红色条带。夹心法反应原理示意图（以AIV为例）间接法胶体金原理胶体金检测试剂的制备原理是胶体金颗粒包被抗某种动物IgG或某种动物IgM的单抗或多抗，硝酸纤维膜上的检测线包被特异性抗原，检测时，血清中的抗体首先被金标抗某种动物IgG或IgM捕获，上行至检测线，再与相应的特异性抗原结合，形成肉眼可见的红色条带。另外，金标结合物亦可采用ProteinA,因其与各种动物IgG抗体均有较高的亲合力，可用于检测人和各种动物血清中的IgG抗体。质控线包被抗ProteinA的多抗。间接法反应原理示意图（以AIV为例）

竞争法原理胶体金颗粒标记单克隆抗体，而检测线包被小分子抗原，质控线包被抗鼠IgG。检测时，样本中的待检抗原首先与金标抗体结合，上行到达检测带时，如待检抗原把一定量的抗体完全饱和，则金标抗体将不能与检测带的抗原结合，不会出现肉眼可见的红色条带，为阳性结果。如标本中无待检抗原，则金标抗体与检测带的抗原结合，形成红色条带，为阴性结果。竞争抑制法反应原理示意图

（以CLE为例）四、?-激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍

（以盐酸克伦特罗胶体金快速检测卡为例）一．适用范围：主要用于定性检测，测定动物尿液，如猪尿、牛尿、羊尿等样品中盐酸克伦特罗的残留。整个检测过程只需要5~10分钟左右，灵敏度为3ng/ml(3ppb)。也就是说当尿液中盐酸克伦特罗的残留大于或等于3ng/ml时，检测卡才能检测到。二、包装每个包装袋中包含盐酸克伦特罗免疫胶体金快速检测卡，滴管1个、干燥剂1个。三、现场筛查步骤1．在进行测试前先完整阅读使用说明书，使用前将检测卡和待检样本溶液恢复至室温。2．从原包装袋中取出检测卡，打开后请在一个小时内就地使用。3．将检测卡平放，用移液器或滴管吸取尿液样品溶液，垂直滴加3-4滴（约70-80ul）于加样孔中，加样后开始计时。4．结果应在5～10分钟读取，其他时间判读无效，根据示意图判定结果。A、阴性（-）：C、T线均出现。表示样品中不含有克伦特罗或其深度低于检测限。B、阳