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培养基适用性检查标准操作规程

目的：明确微生物限度检查用培养基质量检查操作规程。

范围：需进行微生物限度检测的培养基

职责：QC检验员对本标准的实施负责。

1.概述

培养基质量是影响微生物检验结果的重要环节。计数测定用培养基的促生长能力是微生物

限度检查结果判断的重要影响因素，控制菌检查用培养基也可能由于其促生长能力、指示

能力、抑制能力的差异，从而对菌落颜色、形态等指标存在较大差异，影响结果判断的客

观性。

培养基适用性检查是通过检验用培养基与对照培养基的比较，以阳性菌的生长状态或特征

来评价拍段检验用培养基是否符合检验要求。

微生物限度检查用培养基主要分为细菌、霉菌及酵母菌计数测定用培养基和控制菌检查用

培养基两部分。2015版《中国药典》微生物限度检查法中收载了“适用性检查”对培养基

质量进行控制。

2、培养基适用性检查实验的一般要求

2.1培养基适用性检查适用范围

2020版《中国药典》规定微生物计数用的成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养

基均应进行培养基适用性检查。

培养基使用性检查试验可用于确定实验室所用培养基(包括购置的不同批号的成品培养

基、不同批号的脱水培养基干粉、按处方自行配制培养基不同批次的原材料等)、制备程

序（包括水质控制、配制方法、灭菌程序等）、保存条件（温度、湿度、时间及盛装培养

基的容器条件等）等是否满足微生物限度检查用要求。即上述影响培养基质量的各关键控

制点应通过培养基使用性检查试验确定，如果任一控制点发生变化应重新进行培养基适用

性检查。但是影响培养基质量的关键控制点的变化应掌握在微生物实验室质量控制的一般

原则内（见2.2），超过一般原则的培养及是否还能满足微生物限度检查用，无法通过培养

基适用性检查确定。

当检查结果出现异常，或实验室质量控制需要，也可通过培养基适用性检查提供一定依据。

总之，培养基适用性检查是在正常条件下关于培养基质量的实验室控制措施，并不一定在

每次具体的微生物限度检查样品检测试验活动中都必须同时进行培养基使用性检查试验，

但每次微生物检查所用培养基均应经过适用性检查。

2.2微生物限度检查用培养基质量控制的一般原则

2.2.1不同处方培养基的替代使用不能通过培养基使用性检查试验简单确定。

2.2.2.培养基适用性检查不能取代供应商或其他法定标准对培养基的有效期、保存条件、

制备方法等的更严格等的规定。

2.2.3.如果没有特殊规定，培养基配制采用蒸馏水或纯化水均可，但应采用一定措施加以

检测控制，如蒸馏水应核实PH是否为5~7；采用离子交换法制备的纯化水，电阻值应不小

于2MΩ等。

2.2.4尽量临用现配。培养基灭菌后在能取出的前提下，尽快取出，切忌在高压锅内过夜

存留；固体培养基灭菌或融化后，融化状态放置不得超过8h；一般预制培养基可置洁净环

境2~25℃保存，但不应超过20天；固体琼脂培养基熔化再使用应不超过一次。

2.2.5干粉培养基或培养基原料变质不应再用；预制培养基储存过程中发现浑浊、变色、

长菌、严重脱水等变化不应再用。

2.3对照培养基

对照培养基应通过严格的质量研究和控制，具备性能稳定、质量优异的特点。对照培养基

作为一种标准试剂，应具备可靠的来源和保障。

2.4培养基适用性检查指标及常用方法

2.4.1检测指标：促生长能力、指示能力、抑制能力。

2.4.2常用方法：直接接种法、浇碟法、表面接种法（涂布法）。

2.4.3液体培养基通常采用直接接种法测定上述3种指标，接种时应注意接种量不得超过

培养基体积的10%。固体培养基采用浇碟法和表面接种法测定上述指标。采用浇碟法考察

固体培养基时，为了保证取样的平行性，平行测定两皿求平均数；采用表面接种法考察固

体培养基时，表面接种菌液不多于0.2ml/皿，尽量控制在0.1ml/皿，保证取样的平行性，

平行测定两皿观察结果。

3.计数培养基的适用性检查

微生物限度检查中计数用培养基3种，营养琼脂、玫瑰红钠营养琼脂和酵母浸出粉葡萄糖

琼脂。

3.1计数培养基适用性检查试验菌株。

铜绿假单胞菌［CMCC(B)10104］

金黄色葡萄球菌［CMCC(B)26003］

枯草芽孢杆菌［CMCC(B)63501］

白色念珠菌［CMCC(F)98001］

黑曲霉菌［CMCC(F)98003］

菌株培养基菌液制备同微生物限度检查方法验证。

3.2实验操作

3.2.1培养基制备按规定程序新鲜配置胰酪大豆胨琼脂培养基（被检培养基和对照培养

基）、沙氏葡萄糖培养基（被检培养基和对照培养基）