培养基的配制与灭菌实验报告.pdfVIP

培养基的配制与灭菌实验报告

（文章一）：培养基的制备与灭菌实验报告xx师范大学远程教育学

院生物学实验报告报告题目培养基的制备与灭菌姓名刘伟

学号专业生物科学批次/层次指导教师学习中心培养基

的制备与灭菌

（一）、目的要求

1.掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。

2.掌握培养基的配置原则和方法。

3.掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。

（二）、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基：是一种应用最广泛和最普

通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含

有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长

繁殖之用。高压蒸汽灭菌：主要是通过升温使蛋白质变性从而达到

杀死微生物的效果。将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，

通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。待蒸汽将锅内冷空气从排

气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。此时蒸汽不溢出，压力增大，沸

点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌

的目的。

（三）、实验材料

1.药品：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶

液。

2.仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、

量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。

3.其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。

（四）、操作步骤（一）玻璃器皿的洗涤和包装1．玻璃器皿的洗涤

玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、试管、培养皿、量筒等

浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。

移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。洗刷干

净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。2．灭菌前玻璃器皿的包装

（1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套

培养皿包成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，

加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。（2）移液管

的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作用

是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。塞入此小

段棉花应距管口约0.5cm左右，棉花自身长度约1~

1.5cm。塞棉花时．可用一外围拉直的曲别针、将少许棉花塞入管口

内。棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。先

将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖

端放在长条报纸的一端，约成45℃角，折叠纸条包住尖端，用左手

握住移液管身，有手将移液管压紧．在桌面上向前搓转，以螺旋式包

扎起来。上端剩余纸条，折叠打结，准备灭菌。（二）液体及固体

培养基的配制过程1．液体培养基配制（1）称量（假定配制1000ml

培养基）按培养基配方比例依次准确地称取

3.0g牛肉膏、10.0g蛋白胨、

5.0gNaCl放入烧杯（或1000ml刻度搪瓷杯）中．牛肉膏常用玻棒挑

取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。（2）溶

化在上述烧杯中先加入少于所需要的水量（如约700ml），用玻棒搅

匀，然后，在石棉网上加热使其溶解，将药品完全溶解后，补充水到

所需的总体积（1000ml）；如果配制固体培养基时，将称好的琼脂放

人已溶的药品中，再加热溶化，最后补足所损失的水分。（3）调

pH调pH：一般用pH试纸测定培养基的pH。用剪刀剪出一小段pH

试纸，然后用镊子夹取此段pH试纸，在培养基中蘸一下，观看其pH

范围，如培养基偏酸或偏碱时，可用1mol/LNaoH或1mol/LHCl溶

液进行调节。调节pH时，应逐滴加入NaOH或HCI溶液，防止局部

过酸或过碱，破坏培养基中成分。边加边搅拌，并不时用pH试纸测

试，直至pH达

7.4-

7.6。反之，用1mol／LHCl进行调节。2．固体培养基的配制配制

固体培养基时，应将已配好的液体培养基加热煮沸，再将称好的琼脂

(

1.5~2％)加入，并用玻棒不断搅拌，以免糊底烧焦。继续加热至琼脂

全部融化，最后补足因蒸发而失去水分。（三）培养基的分装根据