高效液相色谱法培训.ppt

*保护色谱柱过滤所有的溶剂和样品使用保护柱仪器使用完毕，要冲洗整个系统，移走系统中缓冲液柱子不使用时，两端密封注意柱子使用的pH范围不要高压冲洗柱子，不要高温下过长时间的使用硅胶键合相第86页,共102页，星期六，2024年，5月*常见色谱故障－基线噪音可能的原因－检测池脏－检测器灯能量下降－由泵引起的脉冲－检测器上的温度效应－检测池中有气泡通过第87页,共102页，星期六，2024年，5月*常见色谱故障－基线漂移可能原因－梯度洗脱引起－流动相脏－柱子没平衡－系统中污染物溢出RID检测器温度不稳定第88页,共102页，星期六，2024年，5月*常见色谱故障－鬼峰鬼峰－没有进样就有色谱峰出现原因－流动相脏，尤其是水相常见色谱故障－双峰柱头塌陷或柱床运动泵头过滤芯部分堵塞组分共流出第89页,共102页，星期六，2024年，5月*常见色谱故障－压力过高可能原因－柱子进口过滤芯被污染Purge阀过滤芯被污染色谱柱被污染连接管路堵塞进样器旋转密封阀被堵塞进样针或者针座被堵塞可用分段法来检查哪一段发生堵塞第90页,共102页，星期六，2024年，5月*常见色谱故障－压力过低溶剂进口过滤芯被堵连接管路泄漏或其他备件泄漏溶剂或流速的改变主动阀失灵四元比例阀失灵单向出口阀失灵柱子失效（固定相流失）第91页,共102页，星期六，2024年，5月*常见色谱故障－压力波动可能原因－溶剂进口过滤芯堵塞－溶剂未脱气－泵的密封圈老化－出口单向阀失效－主动阀失效－最常见的原因失泵内有七宝第92页,共102页，星期六，2024年，5月维护流程图吸滤头单向阀柱塞密封圈线路过滤器进样器检测器第93页,共102页，星期六，2024年，5月吸滤头－－定期清洗，更换溶剂时单向阀－－定期清洗，压力波动大时泵－－自动清洗在线过滤器－压力大时清洗第94页,共102页，星期六，2024年，5月材料：不锈钢烧结，孔径10um故障：堵塞表现：管路中不断有气泡生成措施：用5％稀硝酸，超声波清洗，再用蒸馏水清洗吸滤头第95页,共102页，星期六，2024年，5月故障：宝石球或塑料垫片受污导致密封不好表现：系统压力波动大措施：打开排液阀，以异丙醇为流动相输液拆下单向阀，放入异丙醇中，超声波清洗单向阀第96页,共102页，星期六，2024年，5月故障：堵塞现象：系统压力波动大或压力偏高措施：5％稀硝酸，超声波清洗判断依据：关闭排液阀，断开出口管路，设定流速1mL/min，如压力3kgf/cm2，则堵塞。线路过滤器排液阀压力传感器线路过滤器流动相第97页,共102页，星期六，2024年，5月泵的保养：使用流动相尽量要清洁；进液处的砂芯过滤头要经常清洗；流动相交换时要防止沉淀；避免泵内堵塞或有气泡；每次分析结束后，要反复冲洗进样口，防止样品的交叉污染；第98页,共102页，星期六，2024年，5月柱的保养：柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动；当柱子和色谱仪联结时，阀件或管路一定要清洗干净；要注意流动相的脱气；避免使用高粘度的溶剂作为流动相；进样样品要提纯；严格控制进样量；每天分析工作结束后，要清洗进样阀中残留的样品；每天分析测定结束后，都要用适当的溶剂来清洗柱；若分析柱长期不使用，应用适当有机溶剂保存并封闭；第99页,共102页，星期六，2024年，5月色谱柱柱内体积和平衡时间单次样品运行时间=分析时间+色谱柱平衡时间色谱柱平衡时间=10倍柱内体积÷流速 4.6x50 0.5mL 5min 4.6x30 0.3mL 3min 4.6x15 0.15mL 1.5min 4.6x150 1.54mL 15min 2.1x50 0.10mL 5min 60sec2.1x30 0.06mL 3min 36sec2.1x15 0.03mL 1.5min 18sec 色谱柱 柱内平衡时间 尺寸 体积流速 (mm) (Vm)1.0mL/min 色谱柱 柱内平衡时间 尺寸 体积流速 (mm) (Vm)