马铃薯的脱毒培养.ppt

关于马铃薯的脱毒培养第2页,共28页，星期六，2024年，5月水培法与雾培法第3页,共28页，星期六，2024年，5月马铃薯是一种全球性的重要经济作物。适应性广，营养价值高，耐贮藏适运输，既是一种重要的粮食作物，也是一种调节市场供应的重要蔬菜。马铃薯退化问题严重，叶片卷缩，降低产量，影响品质。病毒侵染是马铃薯退化的根源，高温是诱发病毒病的环境条件。第4页,共28页，星期六，2024年，5月危害马铃薯的病毒有17种之多，如X病毒、S病毒、Y病毒、M病毒、A病毒、花叶病毒、纺锤形块茎病毒等。由于马铃薯是无性繁殖作物，病毒逐代积累，日益严重，引起严重退化。马铃薯病毒可使块茎产量减少50%~80%。马铃薯茎尖组织培养—生产无病毒苗—提供优良种薯。第5页,共28页，星期六，2024年，5月一、马铃薯的脱毒与快繁（一）茎尖培养与脱毒1.茎尖培养脱毒程序（1）取材：芽长到15cm时，将顶端切下6-8cm，去掉下面2片叶，在切口处涂上生根生长调节剂后，把切条植入一口径为10cm、内装消毒营养土的花盆中，后用玻璃烧杯罩上，保持10d。第6页,共28页，星期六，2024年，5月马铃薯的脱毒试管苗第7页,共28页，星期六，2024年，5月再将其转入生长箱中，每天光照16h，光照强度3000-4000lx。2周后去掉顶芽，以促进腋芽的生长。当腋芽长到1-2cm时，折下腋生枝，用于消毒、接种。第8页,共28页，星期六，2024年，5月（2）消毒：水洗干净，无菌条件下先用70%的酒精浸组织15-20s，再用2%次氯酸钠溶液浸泡4-5min，然后用无菌水冲洗3次。第9页,共28页，星期六，2024年，5月（3）接种：把芽置于解剖镜下，左手用一把镊子将芽按住，右手用解剖针将叶片和叶原基剥掉，当形似一个闪亮半圆球的顶端分生组织充分暴露出来后，用锋利的长颈刀片将分生组织切下来，上面可带/也可不带叶原基，再用刀片将其接种到培养基上。第10页,共28页，星期六，2024年，5月（4）培养基：MS培养基（提高NH4+、K+浓度，利于茎尖成活）。加入调节物质6-BA0.5mg/L，NAA0.1-1.0mg/L。培养条件：温度25±2℃，光照16h/d当新梢长至2-3cm时，转至生根培养基（MS培养基中加入0.3mg/L的NAA）第11页,共28页，星期六，2024年，5月（5）病毒鉴定（指示植物法）：马铃薯的病毒指示植物：苋科的千日红、藜科的杖藜、茄科的洋酸浆、毛曼佗罗等。从被检植株上取下叶片，置于等容积的缓冲液（0.1mol/L的磷酸钠）中，研成匀浆。在指示植物的叶片上撒少许600号的金刚砂。第12页,共28页，星期六，2024年，5月然后将被检植物的叶汁液涂于其上，并稍加摩擦，以使指示植物叶表面细胞受到侵染，但又不要损伤叶片。约5min后，用水轻轻洗去接种叶片上的残余汁液。一周后如果表现病毒病症状，则说明被检再生植物脱毒失败。第13页,共28页，星期六，2024年，5月第14页,共28页，星期六，2024年，5月2、影响脱毒效果的因素（1）外植体大小：0.2-0.3mm，带1-2个原基为好（2）茎尖所处部位：块茎脐部休眠芽的生长点、块茎顶部的粗壮芽、植株主茎的生长点（3）病毒种类及复合感染（脱毒更困难）PSTV（条纹病毒）、PVS（S病毒）、PVX（X病毒）、PVM（M病毒）、PAMV（丛矮病毒）、PVY（Y病毒）、PVA（A病毒）、PVRV（卷叶病毒）第15页,共28页，星期六，2024年，5月3、无毒材料的保存将无毒原种种在温室或防虫罩内灭过菌的土壤里，以防蚜虫传毒或机械传毒大规模繁殖时，种植在田间隔离区内春播早留种和夏播留种经过茎尖脱毒处理的无病毒植株，再通过离体培养进行繁殖与保存第16页,共28页，星期六，2024年，5月（二）微型薯生产技术1、试管生产（1）单茎节扩大繁殖：由无性繁殖的试管苗中获得茎切段（每个茎段带1-2个叶片或腋芽），每个三角瓶里接4-5个茎段，进行培养。第17页,共28页，星期六，2024年，5月（1）单茎节扩大繁殖：培养条件：22℃，16h补充光照1000lx常用培养基：MS+3%蔗糖+琼脂；MS+2%蔗糖；MS+CCC50mg/L+6-BA6.0mol/L+0.8%琼脂，或MS+50-100mol/L香豆素；MS+3%蔗糖+4%