植物转化及转基因的检测.ppt

植物转化及转基因的检测;基因工程的概念;基因工程的重要环节;植物基因工程的重要环节;植物的遗传转化措施;几种常用植物基因转化措施的比较;Date;水稻（籼稻）根农杆菌转化技术措施;Date;Monocotyledonesarenoteasytohandle–

callusisverydifficulttobeinitiated,andA.tumefaciensisnotpathogenicforthem;DNAwithdesiredgeneandantibioticresistanceiscoatedontothesurfaceofgoldparticles.;气压表;;;分子检测确定转基因的整合和体现;DNA水平的检查措施;

;Sample

DNAextraction

andpurification

PCRreaction

Detectionw/fluorescence/gel

;即時定量PCR(real-timePCR);核酸分子杂交的基本原理;DNA

↓

电泳分离核酸片段

↓

转移至固相支持物（印迹技术）

↓

杂交

↓

洗去未杂交探针

↓

杂交信号检测;印迹法(Blotting);;WesternBlot基本原理;WesternBlot一般流程;转基因植物的分子检测手段;转基因植物的性状检测;转基因水稻抗虫性室内鉴定;转基因抗虫水稻田间抗虫性(福州吴凤）;转EPSP基因水稻抗草苷膦检测;转可溶性淀粉酶基因明恢86（T3）淀粉测定--福州吴风温室（.7）;转基因株系的遗传分析及纯合;基于hpt基因的转基因水稻遗传分析及迅速纯合;筛选保持良好农艺性状转基因材料;转基因植物遗传和体现稳定性的跟踪检测;抗虫转基因水稻培育技术路线;中间试验安全审批书;环境释放安全审批书;抗虫转基因水稻育种工作;回交转育工作;抗虫转基因杂交水稻组合测配筛选;转sck+Bt基因抗虫杂交稻组合;基因操作

安全性;抗性稳定性和遗传稳定性的评价;抗虫转SCK基因稻米的食品安全性检测

;大鼠营养生物运用试验;转基因大米的免疫毒理学评价;;通过有机溶剂或水溶法制备总蛋白

水溶液提取法

针对水、稀盐、稀酸或碱溶液中的蛋白质。稀盐和缓冲系统的水溶液

对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂。

细胞裂解液：50mmol/LTris-HCl,150mmol/LNacl,5mmol/LEDTA,1%NP40，0.05%PMSF，2μg/mLAprotinin,0.5μg/mLLeupeptin，pH8.0

有机溶剂提取法

对于分子中非极性侧链较多的蛋白质可用有机溶剂提取，包括乙醇、

丙酮和丁醇等。

通过层析或电洗脱法制备目的蛋白

;SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳;丙烯酰胺和N,N’-亚甲双丙烯酰胺??

SDS

配胶的Tris缓冲液

TEMED

过硫酸铵(时间)

Tris-甘氨酸电泳缓冲液

;凝胶浓度与蛋白分离范围;Date;转膜;转膜;封闭;一抗、二抗孵育