食品快速检测技术—免疫学快速检测.pptx

胶体金免疫层析

技术概述及特点;;一、胶体金免疫层析技术

概念;

胶体金免疫层析中的三大技术;1.胶体金概述;胶体金颗粒由一个基础金核（原子金Au）及包围在外的双离子层构成，紧连在金核表面的是内层负离子（AuC12－），外层离子层H+则分散在胶体间溶液中，以维持胶体金游离于溶胶间的悬液状态。

;（1）染色—不同粒径，不同颜色

（2）胶体的特性—充分的溶解性，良好的流动性

（3）吸附能力—在不改变蛋白性质的情况下，稳定迅速的吸附蛋白;1.膜概念

以硝酸纤维素为基质，经过匀浆，滚筒铺膜，烘制成型从而制的一定孔径的硝酸纤维素膜。;三、膜技术;四、免疫学技术;2、抗原抗体的结合;五、胶体金免疫层析技术特点及发展;五、胶体金免疫层析技术特点及发展;农产品质量安全定性检测

免疫;免疫;免疫;抗原;抗原;抗原;抗原;免疫学基础;免疫学基础;免疫学基础;免疫学基础;胶体金的制备简介;;一、胶体金制备方法;1、还原法制备原理（氯金酸法）

氯金酸(HAuCl4)在还原剂作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，形成带负电的疏水胶溶液。由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。;还原剂的种类;三、胶体金制备;三、胶体金制备;三、胶体金制备;1.还原剂不是一次快速加入;

2.容器太大或太小,及在100℃加温时间超过10min;

3.在室温或4℃保存太久;

4.低温保存。

;微小颗粒胶体呈红色，但不同大小的胶体呈色有一定的差别。最小的胶体金（2～5nm）是橙黄色的，中等大小的胶体金（10～20nm）是酒红色的，较大颗粒的胶体金（30～80nm）则是紫红色的;检测1：待胶体金溶液冷却至室温，肉眼观察胶体金溶液的颜色是不是酒红色，是否澄清，无漂浮物或者沉淀。

;检测2：用分光光度计检测吸光度：检测最大吸光度值是否在525nm附近，方法是可以用光谱扫描法找到最大吸光度值波长，也可以用多波长测量法检测525nm及其附近波长的吸光度，比较大小。

最大吸光度值在525nm+3nm处为合格.

检测3：检测最大吸光度处吸光值与456nm处吸光度值的比值，是否在1.6-1.8之间。;胶体金在洁净的玻璃器皿中可较长时间保??,加人少许防腐剂(如0.02%NaN3)可有利于保存。

保存不当时会有细菌生长或有凝集颗粒形成。

少量凝集颗粒并不影响以后胶体金的标记。;胶体金的结构及性质;胶体金的结构与性质;胶体金的结构与性质;胶体金的结构与性质;胶体金的结构与性质;胶体金免疫层析试纸条构成

;胶体金免疫层析试纸条构成;构成部件作用;胶体金检测卡的原理（夹心法）;;竞争法;竞争法;竞争法;胶体金免疫层析试纸检测

猪肉中的克伦特罗;原理;原理;操作步骤;操作步骤;操作步骤;注意事项;胶体金纸条（检测卡）;胶体金纸条特性;一、胶体金纸条特性;二、胶体金纸条种类;主要由样品垫、金垫、硝

酸纤维素膜（NC膜），吸

水垫4个部分组成，从下至

上依次首尾互相衔接，粘

贴在PVC底板上。;⑴样品垫：检测样本滴加位置，对检测样本具有一定的过滤和缓冲作用，降低样本中离子强度或者酸碱度对检测结果的干扰。

⑵金垫：将胶体金标记抗体通过干燥固定在玻璃纤维素膜上，是追踪抗体与抗原的反应。

⑶硝酸纤维素膜：膜上预先包被上检测线和质控线，能够与胶体金标记物发生免疫反应相结合，使胶体金在检测线发生聚集，根据检测线的显色状况进行判读结果。

⑷吸水垫：通过吸水作用使液体样品向上流动，带动金垫上的金标抗体向上移动，从而与检测线的抗原发生反应;;1竞争法

Y1:Clen单克隆抗体

T:Clen-BSA

Y2:羊抗鼠抗体

;预先在硝酸纤维素膜上的检测线（T）和质控线（C）分别包被上盐酸克伦特罗抗原（Clen-BSA）和羊抗鼠二抗，将胶体金标记克伦特罗免疫鼠抗体并固着在玻璃纤维上制成金垫，组装成试纸条。

将检测的尿样滴加在样品垫上：

当尿样中盐酸克伦罗达到一定的浓度时，即于固着在载体上的胶体金标记抗体结合，从而阻止其与固着在检测线（T）的抗原结合，无法在检测区形成紫红色条带。

若尿样中不含盐酸克伦特罗（Clen)或其代谢物时，胶体金标记抗体与检测区的抗原结合，在检测线（T）形成紫红色条带。样品和金标记复合物继续往上移动，在质控线（C）上与包被的羊抗鼠二抗结合，在质控线（C）上形成一条紫红色条带，证明本检测卡有效。

无论尿样中是否含有盐酸克伦特罗（Clen)在质控线（C）均应出现一条紫红色条带。;2.夹心法;预先在硝酸纤维素膜的检测线（T）上和质控线（C）分别包被上犬细小抗体和羊抗鼠二抗，将胶体金标记的犬细小免疫鼠抗体固着在玻璃纤维上制成金垫