高效液相色谱分析法HPLC.ppt

Column: IonPacNS1、NG1Eluent: 2mMTBAOH, 24%～48%CANgradient in10minFlowrate: 1.0mL/min Detection: Conductivity(suppressortype) （ASRSMPICMode）Regenerator:10mNH2SO41.Methanesulfonicacid5.0μg/mL(ppm)2.1-Propanesulfonicacid8.63.1-Butanesulfonicacid8.74.1-Hexanesulfonicacid8.8 5.1-Heptanesulfonicacid8.9 6.1-Octanesulfonicacid8.9 7.1-Decanesulfonicacid9.10Retentiontime(min)12168μS0.0416234578.0反相离子对分离测定第63页,共78页，星期六，2024年，5月第64页,共78页，星期六，2024年，5月8.3.6体积排阻色谱

size-exclusionchromatography固定相：凝胶,具有一定大小孔隙分布软质凝胶:葡聚糖凝胶、琼脂凝胶等。多孔网状结构水为流动相。适用于常压排阻分离半硬质凝胶:苯乙烯-二乙烯基苯交联共聚物，有机凝胶非极性有机溶剂为流动相，不能用丙酮、乙醇等极性溶剂硬质凝胶:多孔硅胶、多孔玻珠等化学稳定性、热稳定性好、机械强度大，流动相性质影响小，可在较高流速下使用原理：按分子尺寸大小分离可对相对分子质量在100-105范围内的化合物按质量分离第65页,共78页，星期六，2024年，5月凝胶色谱柱的总体积VA为：VA＝Vg＋Vi＋V0Vg：填料骨架的体积Vi：填料孔体积V0：填料颗粒之间的体积A:排阻极限B:渗透极限凝胶色谱法的局限性：洗脱体积总是位于V0到Vi＋V0之间，因此凝胶色谱峰容量有限不能完全分离复杂的、多组分体系不能用于分子大小相似或分子量相差10％以内的组分的分离V0Vi第66页,共78页，星期六，2024年，5月凝胶色谱法在聚合物研究中的应用色谱柱：KF-80M(I.d.2cm,L60cm)流动相：四氢呋喃1ml/min柱前压：1.5Mpa常温检测器：UVD254nm第67页,共78页，星期六，2024年，5月8.3.7亲和色谱Affinitychromatograph原理：利用生物大分子和固定相表面存在的某种特异性亲和力，进行选择性分离固定相：将具有生物活性的配位体以共价键结合到不溶性固体基质上制得生物活性配位体：常用的有酶（如底物及其类似物）、辅酶（如类固醇）、抗体（植物激素）、激素（如糖和多糖）、抗生素（核苷酸）等基质天然有机高聚物制成的凝胶，如琼脂糖、葡聚糖等合成有机聚合物形成的凝胶，如聚丙烯酰胺及其衍生物应用：主要用于蛋白质和生物活性物质的分离与制备Lockandkeystructuralcomplex“锁匙结构络合物”第68页,共78页，星期六，2024年，5月§8.4液相色谱的流动相液相色谱的流动相又称为：淋洗液，洗脱剂流动相组成改变，极性改变，可显著改变组分分离状况按流动相组成分：单组分和多组分按极性分：极性、弱极性、非极性按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗常用溶剂：己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙腈、水采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间第69页,共78页，星期六，2