外来化合物生殖发育毒性作用及其评价.ppt

（二）雄性生殖毒性试验3、大鼠睾丸间质细胞与支持细胞分离培养虽然整体动物实验是评价化学物质性腺毒性的主要途径，但其耗时、费力，而且在中毒机制的研究中也受到诸多限制。应用睾丸体外培养的手段检测化学物质对睾丸功能的影响，不失为一种简便、可靠的方法。1)睾丸间质细胞：间质细胞的主要功能是分泌雄激素（睾丸酮）。分布在睾丸曲细精管的结缔组织中，细胞呈圆形、梭形或多角形，体积较大，胞核有1－2个核仁，胞浆丰富，呈嗜酸性，含有大量滑面内质网。（二）雄性生殖毒性试验2）睾丸支持细胞：是曲细精管上皮除各级生精细胞外，与精子生成有关的细胞之一。虽然它是睾丸生精上皮中惟一的非生殖细胞，但它对精子的发生发育具有十分重要的意义。支持细胞能分泌多种生物活性物质，对生精细胞起到支持和营养作用。因为生精细胞本身不能利用萄萄糖，它所必须的能量是由支持细胞糖酵解所产生的乳酸和丙酮酸来提供。支持细胞具有较强的糖酵解能力，可将萄萄糖转化为乳酸和丙酮酸。支持细胞的乳酸含量和乳酸脱氢酶活性的变化常被作为反映支持细胞功能以及对生精细胞能量代谢的影响和对生精过程干扰的指标。（二）雄性生殖毒性试验4、睾丸中标志酶活性检测睾丸中酶含量和活性的改变是生殖毒性的敏感指标之一，可以简便且可靠地反映出外来化学物质对睾丸功能的损害。已知睾丸中的酶大致可分为两类，一类酶其含量和活性随着精子的形成、成熟而增高，如乳酸脱氢酶同工酶、山梨醇脱氢酶、透明质酸酶、α-磷酸甘油脱氢酶等；另一类则是随着精子的形成、成熟，其活性下降，如6-磷酸葡萄糖脱氢酶、苹果酸脱氢酶、三磷酸甘油醛脱氢酶以及异柠檬酸脱氢酶等。（二）雄性生殖毒性试验5、雄性激素检测睾丸生成精子的同时还具有分泌性激素的功能。睾丸的功能主要靠卵泡刺激素、促黄体生成素和睾酮来维持和调节。卵泡刺激素主要作用于曲细精管的支持细胞，使其合成与分泌雄性激素结合蛋白。后者的作用是使雄性激素浓聚，维持曲细精管中的雄性激素达到一定水平。促黄体生成素主要作用于间质细胞，使其合成和分泌睾酮。雄性生殖系统无论生精过程、精子成熟过程，还是附属性腺的分泌活动，都需要有足够的睾酮。检测上述三种性激素含量有助于生殖毒性的评价以及生殖毒作用机制的探讨。（二）雄性生殖毒性试验6、雄性生殖器毒性病理检验从形态学角度评价外来化学物质对雄性生殖系统的毒性作用，是雄性生殖毒理学研究中不可缺少的较为敏感的指标和重要手段。睾丸、附睾、前列腺以及精囊的重量和大小的改变常是接触有害化学物质的明显征兆。外来化学物质作用于雄性生殖系统，可引起睾丸及其附属器官、组织或细胞的病理性损伤。睾丸组织最易受到外来化学毒物的侵害，因此在亚慢性或慢性动物实验中，睾丸组织形态检验也是一项重要的指标。（三）雌性生殖毒性试验在哺乳类动物中，雌性生殖系统包括卵巢及其附属器官，如输卵管、子宫及阴道。外来化学物质对雌性生殖系统的损伤主要表现在对雌性卵巢功能的干扰。卵巢功能包括生殖功能（卵细胞的发育、排卵、黄体形成）和内分泌功能（雌激素和孕激素等性激素的生成和分泌）。卵巢的内分泌功能受垂体前叶促性腺激素（FSH）和黄体生成激素（LH）的控制，发生周期性的变化（卵泡的发育、排卵、黄体生成）。（三）雌性生殖毒性试验垂体分泌的FSH使卵泡生成，卵泡发育至次级卵泡时卵泡膜内层细胞分泌雌激素，雌激素作用于子宫内膜，使子宫内膜呈增生期改变。同时它们又反馈地抑制下丘脑和垂体停止分泌促性腺激素。于是，黄体退化、血中孕酮和雌激素含量下降。此时，下丘脑及垂体不再受抑制，促性腺激素又开始分泌。卵巢中又有卵泡的生长。如此生长反复循环，从而形成卵巢内周期性变化。卵巢的周期性变化与动情周期密切相关。小鼠及大鼠的动情周期是4~5天节律性地重复一次。预定成熟的卵泡大约在动情期开始发育，下一个动情期末排卵。（三）雌性生殖毒性试验卵巢中可以看到不同发育阶段的黄体。黄体为排卵后由卵泡迅速转变成的富有血管的腺体样结构。黄体细胞成多边形，胞质内有黄色颗粒和脂滴，呈黄色。细胞以颗粒细胞占多数，细胞大，着色浅，分泌孕酮。黄体的发育及存在时间多少，决定于排出的卵是否受精。若卵子未受精，黄体仅维持二周即萎缩退化，被结缔组织结疤所代替，即白体（corpusalbicans）；若卵子受精成功并开始妊娠，黄体继续增长，则为妊娠黄体，至妊娠2～3月后慢慢萎缩。（三）雌性生殖毒性试验1、发情周期的观察1）基本原理：啮齿类动物的发情周期可分为发情前期、发情