DB21_T 2598—2016 褐藻酸寡糖含量的检测.doc

ICS

A43

71.040.01

DB21

辽宁省地方标准

DB21/T2598—2016

褐藻酸寡糖含量的检测

Determinationofthecontentofalginateoligosaccharides

28发布2016-03-2016-05-28实施

28发布

2016-03-

辽宁省质量技术监督局发布

DB21/T2598—2016

前言

本标准是依据GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草的。本标准由中国科学院大连化学物理研究所提出。

本标准由大连市质量技术监督局归口。

本标准起草单位：中国科学院大连化学物理研究所。

本标准主要起草人：赵勇、尹恒、陈玮。

I

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DB21/T2598—2016

褐藻酸寡糖含量的检测

1范围

本标准规定了褐藻酸寡糖含量的检测的术语和定义、原理、仪器、试剂、操作步骤和重复性。

本标准适用于从海带、马尾藻、巨藻、泡叶藻等褐藻类植物中提取的褐藻酸盐，经过加工制成的褐

藻酸寡糖产品中褐藻酸寡糖含量的测定。

2术语和定义

下列术语和定义适用于本文件

2.1

褐藻酸寡糖AlginateOligosaccharides,AOS

褐藻酸在酸水解或生物酶降解条件下转变为聚合度为2～20的线性低聚糖。

2.2

褐藻酸寡糖的含量ContentofA0S

褐藻酸寡糖产品中褐藻酸寡糖占褐藻酸寡糖产品的质量百分比。

3原理

在沸水浴条件下，利用含四硼酸钠的硫酸溶液将待测样品中的褐藻酸寡糖彻底水解，生成糖醛酸。糖醛酸可与间羟联苯试剂发生反应，生成紫红色物质，在波长为525nm处有吸收。在吸收值为0～1.0的范围内，该紫红色物质的吸收值与糖醛酸浓度呈线性关系，通过计算可得到待测样品中糖醛酸的浓度和

总质量。利用糖醛酸的总质量除以待测样品的总质量，计算得出褐藻酸寡糖的含量。

4仪器

4.1分光光度计。

4.2分析天平：感应量为0.0001g。

4.3电子天平：感应量为0.01g。

4.4水浴锅。

4.5漩涡混合振荡器。

4.6恒温干燥箱。

5试剂

5.1去离子水。

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DB21/T2598—2016

5.2浓硫酸：分析纯。

5.3半乳糖醛酸：色谱纯，纯度≥98%。

5.4氢氧化钠：分析纯。

5.5十水合四硼酸钠：分析纯。

5.6间羟联苯：优级纯，纯度≥98%。

5.70.1g/L半乳糖醛酸标准溶液：将0.10g半乳糖醛酸用200mL～300mL去离子水在烧杯中溶解，再将溶解后溶液移入1L容量瓶中，加去离子水至容量瓶刻度线。

5.8120mM四硼酸钠-硫酸溶液：将4.576g十水合四硼酸钠用50mL～60mL浓硫酸在烧杯中溶解，再将溶解后溶液移入100mL容量瓶中，加浓硫酸至容量瓶刻度线。

5.90.5%(w/v)氢氧化钠溶液：将0.50g氢氧化钠用50mL～60mL去离子水在烧杯中溶解，再

将溶解后溶液移入100mL容量瓶中，加去离子水至容量瓶刻度线。

5.100.15%(w/v)间羟联苯试剂：将0.15g间羟联苯用50mL～60mL上述氢氧化钠溶液在烧杯中溶解，再将溶解后溶液移入100mL容量瓶中，加上述氢氧化钠溶液至容量瓶刻度线，置于棕色

瓶中，阴暗处保存。

6操作步骤

6.1待测样品的预处理

待测样品为固体，按下述步骤直接检测样品中褐藻酸寡糖的含量。待测样品为液体，需先利用恒温

干燥箱将液体进行干燥处理，然后再按下述步骤对样品中褐藻酸寡糖的含量进行检测。

6.2标准曲线制作

6.2.1取10mL带塞试管，分别加入0mL,0.1mL,0.2mL,0.3mL,0.4mL半乳糖醛酸标准溶液(5.7),利用去离子水将每个试管中溶液的总体积定容为0.4mL,置于漩涡混合振荡器上振荡30s,得到浓度分别为0μg/mL,25μg/mL,50μg/mL,75μg/mL,100μg/mL的半乳糖醛酸梯度溶液。

6.2.2将上述试管置于冰水浴中预冷3min～5min,然后在每个试管中缓慢加入2.4mL四硼酸钠-硫酸溶液(5.8),加盖后置于漩涡混合振荡器上振荡30s。随后将试管置于沸水浴中反应20min,反应结束后将试管冷却至室温。

6.2.3在每个试管中分别加入80μL间羟联苯试剂(5.10),置于漩涡混合振荡器上振荡30s,室温放置10min。

6.2.4利用分光光度计测量525nm波长