药物色谱分离技术—高效液相色谱（制药技术课件）.pptx

色谱分离技术--高效液相色谱

高效液相色谱—色谱分离技术大纲1.高效液相色谱概念2.高效液相色谱特点3.高效液相色谱设备配置4.固定相5.流动相

高效液相色谱—色谱分离技术高效液相色谱法(highpressureLiquidchromatography，HPLC)是利用物质在两相之间吸附或分配的微小差异达到分离的目的。当两相作相对移动时，被测物质在两相之间做反复多次的分配，这样使原来微小的差异产生了很大的分离效果，达到分离、分析和测定一些理化常数的目的。1.高效液相色谱概念

高效液相色谱—色谱分离技术①分离效能高。由于新型高效微粒固定相填料的使用，液相色谱填充柱的柱效可达2×103～5×104块/m理论塔板数，远远高于气相色谱填充柱103块/m理论塔板数的柱效。②选择性高。由于液相色谱柱具有高柱效，并且流动相可以控制，改善了分离过程的选择性。因此，高效液相色谱法不仅可以分析不同类型的有机化合物及其同分异构体，还可分析在性质上极为相似的旋光异构体，在高疗效的合成药物和生化药物的生产控制分析中发挥了重要作用。2.高效液相色谱特点

高效液相色谱—色谱分离技术③检测灵敏度高。在高效液相色谱法中使用的检测器大多数都具有较高的灵敏度。如被广泛使用的紫外吸收检测器，最小检出量为10～9mol/L；用于痕量分析的荧光检测器，最小检出量为10～12mol/L。④分析速度快。由于高压输液泵的使用，相对于经典液相(柱)色谱，其分析时间大大缩短，当输液压力增加时，流动相流速会加快，完成一个样品的分析时间仅需几分钟到几十分钟。2.高效液相色谱特点

高效液相色谱—色谱分离技术高效液相色谱法除具有以上特点外，它的应用范围也日益扩展。由于它使用了非破坏性检测器，可用于样品的纯化制备。样品被分析后，在大多数情况下，可除去流动相，实现对少量珍贵样品的回收。同学们可以通过下表，了解高效液相色谱法与经典液相（柱）色谱法的差别。2.高效液相色谱特点

高效液相色谱—色谱分离技术高压输液系统(输液泵)、进样系统(进样器)、分离系统(色谱柱)和检测系统(检测器)。此外还配有辅助装置：如梯度淋洗，自动进样及数据处理等。如图：3.设备配置

高效液相色谱—色谱分离技术HPLC固定相骨架颗粒材料可分为无机和有机两类。无机类中应用最多的是硅胶，其他如多孔玻璃、羟基磷灰石、石墨炭黑等。有机类主要为有机高分子合成材料，最为常见的是交联聚苯乙烯，其他常用的还有高交联琼脂糖、交联聚乙烯醇、交联聚乙烯吡啶和交联聚乙醇等。4.固定相

高效液相色谱—色谱分离技术（1）流动相特性①液相色谱的流动相又称为：淋洗液，洗脱剂。流动相组成改变，极性改变，可显著改变组分分离状况；②亲水性固定液常采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定相的极性，称为正相液液色谱法，极性柱也称正相柱。③若流动相的极性大于固定液的极性，则称为反相液液色谱，非极性柱也称为反相柱。组分在两种类型分离柱上的出峰顺序相反。5.液相色谱的流动相

高效液相色谱—色谱分离技术（2）流动相类别按流动相组成分：单组分和多组分；按极性分：极性、弱极性、非极性；按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗。常用溶剂：己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙腈、水。采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。5.液相色谱的流动相

高效液相色谱—色谱分离技术（3）流动相选择在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。采用正相液-液分配分离时，首先选择中等极性溶剂，若组分的保留时间太短，降低溶剂极性，反之增加。也可在低极性溶剂中，逐渐增加其中的极性溶剂，使保留时间缩短。常用溶剂的极性顺序：水(最大)甲酰胺乙腈甲醇乙醇丙醇丙酮二氧六环四氢呋喃甲乙酮正丁醇乙酸乙酯乙醚异丙醚二氯甲烷氯仿溴乙烷苯四氯化碳二硫化碳环己烷己烷煤油(最小)。5.液相色谱的流动相

高效液相色谱—色谱分离技术（4）选择流动相时应注意的几个问题①尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。②避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。③试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。④流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。5.液相色谱的流动相

高效液相色谱—色谱分离技术6.HPLC分离方法的选择依据