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猪瘟病毒竞争磁微粒CLIA抗体检测方法

1范围

本文件规定了猪瘟病毒竞争磁微粒CLIA抗体检测方法的试剂、仪器设备及耗材、技术原理、操作

步骤、结果计算和判定的要求。

本文件适用于定量检测猪血清中针对猪瘟病毒的特异性抗体。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T35906猪瘟抗体间接ELISA检测方法

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4符号和缩略语

下列缩略语适用于本文件。

CLIA:化学发光免疫分析法（ChemiluminescenceImmunoassay）

ELISA:酶联免疫吸附试验（EnzymeLinkedImmunosorbentAssay）

CSFV:猪瘟病毒（ClassicalSwineFeverVirus）

5试剂

5.120×浓缩洗液，按照附录A.1配制

5.2磁微粒工作液（偶联链霉亲和素的磁性微粒）。

5.3校准品稀释液,按照附录A.2配制。

5.4抗原工作液（生物素标记的CSFV重组蛋白）。

5.5抗体工作液（吖啶酯标记的CSFV单克隆抗体）。

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5.6CSFV抗体工作校准品

包括工作校准品1、工作校准品2、工作校准品3、工作校准品4、工作校准品5、工作校准品6，

抗体含量分别为3.125U、12.5U、50U、200U、800U、3200U，按照附录B制备。

5.7CSFV抗体产品校准品

包括产品校准品1和产品校准品2，抗体含量分别为50U和800U，按照附录C.1制备。

5.8CSFV抗体质控品

包括质控品1和质控品2，质控品1抗体含量≤20U，质控品2抗体含量范围为140U～260U，按

照附录C.2制备。

5.9化学发光底物。

6仪器设备及耗材

本方法应准备仪器设备及耗材如下：

——全自动化学发光免疫分析仪：磁微粒酶促化学发光检测设备；

——电子天平：最大称量：Max=220g；最小称量：Min=10mg；显示分度值：d=0.1mg；

——离心机：最高转速：16000rpm；

——可调单道移液器（0.1μL～2.5μL，2μL～20μL，20μL～200μL，100μL～1000μL）；

——1.5mL尖底离心管；

——反应杯；

——试剂船。

7技术原理

本方法采用磁微粒化学发光--竞争法原理进行检测。首先将链霉亲和素磁珠、生物素标记的抗原、

吖啶酯标记的抗体和待检血清混合孵育，发生特异性免疫反应；然后加入化学发光底物，读取发光值。

通过检测吖啶酯标记的抗体工作校准品拟合校准曲线，通过产品校准品校准曲线，将待测样本代入校准

曲线计算血清中的抗体含量，判定结果。发光强度与猪瘟病毒抗体的含量成反比。

8检测前准备

8.1样品采集及保存

样品采集按照NY/T541进行。无菌注射器静脉采血，不少于2mL，用自然析出法分离血清后，置

于无菌血清管中，按照GB19489样品处理的生物安全措施、实验室生物安全通用要求处理样本，若

在一周内检测，可置2℃～8℃条件下保存，若超过一周检测，应置于-20℃以下冷冻保存。

血清样本运输时应注意冷藏。

8.2样品处理

取8.1中的样品，8000rpm，离心2min，取上清放于1.5mL尖底离心管中，体积应大于300μL，待

检；若样品中存在沉淀或絮状物等杂质，应离心去除杂质，轻微操作，避免出现泡沫。

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8.3溶液配制

洗涤液：将20×浓缩洗液用无离子水或蒸馏水1:20倍稀释，装入洗涤液桶。

去离子水或蒸馏水均应符合GB/T6682的要求。

8.4仪器准备

阅读全自动化学发光免疫分析仪说明书，放置反应杯，扫码放置化学发光底物、系统维护液