药物色谱分离技术—色谱分离操作过程（制药技术课件）.pptx

色谱分离技术--薄层色谱分离操作

薄层色谱分离操作—色谱分离技术大纲1.薄层色谱法概念2.薄层色谱操作

薄层色谱分离操作—色谱分离技术薄层色谱法（TLC）：将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。待点样、展开后，根据比移值（Rf）与适宜的对照物按同法所得的色谱图的比移值（Rf）作对比，用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。薄层色谱操作包括：制板、点样、展开、显色、Rf计算等。（一）薄层色谱法概念

薄层色谱分离操作—色谱分离技术1.薄层板的制备薄层板的薄层应尽可能的均匀而且厚度要固定。制备薄层板，首先将吸附剂调成糊状：如称取约3g硅胶G，加入到6-7mL0.5%的羧甲基纤维素钠水溶液中，调成均匀的糊状物。这一步一定要将吸附剂逐渐加入到溶剂中，边加边搅拌；如果把溶剂加到吸附剂中，容易产生结块。然后采用简单的平铺法和倾斜法将糊状物涂布在干净的载玻片上，制成薄层板。（二）薄层色谱操作

薄层色谱分离操作—色谱分离技术一般情况薄层越薄分离效果越好。铺板的方法有两种：(1)平铺法：如图所示，将自制涂布器洗净，把干净的载玻片在涂布器中摆好，上下两边各夹一块比载玻片厚0.25mm的玻璃板，在涂布器槽中倒入糊状物，将徐布器自左向右推，即可将糊状物均匀地涂在玻璃板上。（二）薄层色谱操作

薄层色谱分离操作—色谱分离技术(2)倾斜法如没有涂布器，则可将调好的糊状物倒在载玻片上，用药匙摊开后，用手摇晃并轻轻敲击玻板背面，使其糊状物均匀铺开且表面均匀光滑。（二）薄层色谱操作

薄层色谱分离操作—色谱分离技术涂好的薄层板室温水平放置晾干后，放入烘箱内加热活化，活化条件根据需要而定。硅胶板一般在烘箱中渐渐升温，维持105-110℃活化30min。氧化铝板在200-220℃烘4h可得活性Ⅱ级的薄板。150-160℃烘4h可得活性Ⅲ-Ⅳ级的薄板。（二）薄层色谱操作

薄层色谱分离操作—色谱分离技术薄层板的活性与含水量有关，其活性随含水量的增加而下降。注意硅胶板活化时温度不能过高，否则硅醇基会相互脱水而失活。活化后的薄层应放在干燥器内保存。（二）薄层色谱分离操作

薄层色谱分离操作—色谱分离技术2.点样点样所用工具如图所示。先用铅笔在距薄层板一端1cm处轻轻划一横线作为基线，然后将样品溶于低沸点溶剂配成的溶液，用毛细管点样。在薄层色谱中，样品的用量对物质的分离效果有很大影响，所需样品的量与显色剂的灵敏度、吸附剂的种类、薄层的厚度均有关系。（二）薄层色谱操作操作

薄层色谱分离操作—色谱分离技术2.点样样品太少，斑点不清楚，难以观察；样品量太多，往往出现斑点太大或拖尾现象，以至不易分开。若因样品溶液太稀，可重复点样，但应待前次点样的溶剂挥发后方可重新点样，样点直径一般以2-4mm为宜。同一薄层上的样点直径应一致。另外点样要轻，不可刺破薄层。（二）薄层色谱操作操作

薄层色谱分离操作—色谱分离技术3.展开将薄层板放入适宜的展开缸内展开。展开剂液面不要超过薄层板的基线。薄层板的展开需要在密闭的色谱缸(也可用标本缸或广口瓶等)中进行，如图所示。用来展开样品中各组分的溶剂(流动相)称为展开剂。（二）薄层色谱操作

薄层色谱分离操作—色谱分离技术3.展开先将一定量展开剂放在色谱缸中，盖上缸盖，让缸内溶剂蒸气饱和5-10min。再将点好试样的薄层板样点一端朝下放入缸内(注意控制器皿中展开剂的量，切勿使样点浸入展开剂中），盖好缸盖，展开剂因毛细管效应而沿薄层上升，样品中组分随展开剂在薄层中以不同的速度自下而上移动而导致分离。当展开剂前沿上升到样点上方8-10cm时取出薄层板，放平，铅笔标明溶剂前沿位置，冷风吹干溶剂。计算比移值。（二）薄层色谱操作

薄层色谱分离操作—色谱分离技术化合物在薄板上移动距离的多少取决于所选取的溶剂不同。但凡溶剂的极性越大，对化合物的洗脱能力也越大，即Rf值也越大。一个好的溶剂体系应该使混合物中所有的化合物都离开基线，但并不使所有化合物都到达溶剂前端，Rf值最好在0.15～0.85之间。最理想的Rf值为0.4-0.5。（二）薄层色谱操作

薄层色谱分离操作—色谱分离技术当一种溶剂不能很好地展开各组分时，常选择用混合溶剂作为展开剂。合适的混合展开剂常需多次仔细选择才能确定。一些常用溶剂和它们的相对极性：（二）薄层色谱操作

薄层色谱分离操作—色谱分离技术4.显色展开的薄层板上化合物斑点本身有颜色时，可直接观察。若化合物本身无色，可在紫外灯下观察荧光斑点，也可用显色剂显色。简单常用的显色剂是碘蒸气，广口瓶中放置少