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高效液相色谱法

HPLC

第一节概述

高效液相色谱法（highperformanceliquidchromatography,

HPLC）：在经典液相柱色谱基础上引入气相色谱的理论和技术，

采用高压泵、高效固定相、高灵敏度检测器发展而成的一种分

离分析方法。

一、HPLC与经典LC区别

1．经典LC：仅做为一种分离手段

柱内径1~3cm，固定相粒径100μm且不均匀

常压输送流动相

柱效低（H↑，n↓）

分析周期长

无法在线检测

2．HPLC：分离和分析

柱内径2~6mm，固定相粒径10μm

高压输送流动相

柱效高（H↓，n↑）

分析时间大大缩短

可以在线检测

二、HPLC与GC差别

相同：兼具分离和分析功能，在线检测

差别：分析对象、操作条件、流动相

1．分析对象

GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品，

占有机物的20%；

HPLC：溶解后能制成溶液的样品，不受样品挥

发性和热稳定性的限制。用途广泛，占有机物的80%。

2.操作条件

GC：柱温

HPLC：流动相的极性

3．流动相差别

1）GC：流动相为气体

组分与流动相无作用力，只与固定相作用

2）HPLC：流动相为液体

流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、

改善R增加了因素，对分离起很大作用；

流动相种类较多，选择余地广；

流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用；

选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相，可以增加

分离选择性。

三、HPLC的特点和应用

“三高”“一快”“一广”

高柱效

高灵敏度

高选择性

分析速度快

应用范围广泛（可分析80%有机化合物）

谢谢