含兔出血症病毒VP60蛋白病毒样颗粒的兔三联灭活疫苗的研究.pptxVIP

含兔出血症病毒VP60蛋白病毒样颗粒的兔三联灭活疫苗的研究汇报人：2024-02-06

引言材料与方法VP60蛋白病毒样颗粒的制备与鉴定兔三联灭活疫苗的制备及质量评价疫苗免疫原性与保护力评价结论与展望contents目录

01引言

兔出血症病毒（RHDV）对兔群健康造成严重威胁，预防和控制该病毒具有重要意义。VP60蛋白是RHDV的主要结构蛋白，具有良好的免疫原性，是疫苗研发的关键靶点。病毒样颗粒（VLPs）具有与天然病毒相似的结构和免疫原性，但无感染性和复制能力，是一种安全的疫苗候选抗原。研究背景与意义

VLPs技术在疫苗研发领域得到广泛应用，已成功应用于多种病毒疫苗的研发。兔三联灭活疫苗可同时预防兔出血症、兔黏液瘤病和兔痘三种疾病，具有广阔的市场前景。国内外已有多款基于VP60蛋白的RHDV疫苗上市，但存在免疫保护期短、免疫效果不稳定等问题。国内外研究现状及发展趋势

构建含兔出血症病毒VP60蛋白病毒样颗粒的兔三联灭活疫苗，提高疫苗的免疫原性和稳定性。评价该疫苗对兔群的免疫保护效果，为疫苗的临床应用提供科学依据。推动兔病毒病疫苗的研发进程，促进兔养殖业的健康发展。本研究的目的和意义

02材料与方法

0102兔出血症病毒VP60蛋…由本实验室制备并保存。兔病毒性出血症病毒（R…购自中国兽医药品监察所。兔多杀性巴氏杆菌（Pm…由本实验室分离鉴定并灭活制备。兔波氏杆菌（Bb）灭活…由合作单位提供。疫苗佐剂选用经批准可用于动物疫苗的佐剂。030405实验材料

采用本实验室建立的昆虫细胞表达系统，表达并纯化VP60蛋白VLPs。VLPs的制备与纯化灭活抗原的制备疫苗配制与乳化疫苗质量检测将RHDV、Pm和Bb分别进行大量培养，灭活后制备成灭活抗原。将VLPs与三种灭活抗原按一定比例混合，加入佐剂后进行乳化，制备成兔三联灭活疫苗。对制备的疫苗进行物理性状、无菌检验、安全检验和效力检验等全面质量检测。实验方法

选用健康易感家兔，体重2.0-2.5kg，雌雄各半。实验动物将家兔随机分为4组，每组至少10只。分别为疫苗免疫组、攻毒对照组、空白对照组和佐剂对照组。动物分组实验动物与分组

疫苗接种与攻毒方案疫苗接种疫苗免疫组家兔按规定剂量和程序接种兔三联灭活疫苗，共免疫2次，间隔2周。其他组别家兔接种相应对照物质。攻毒试验在第二次免疫后2周，对疫苗免疫组和攻毒对照组家兔进行RHDV、Pm和Bb混合攻毒，观察并记录家兔的发病和死亡情况。抗体检测在免疫前、免疫后和攻毒后不同时间点采集家兔血液，分离血清，检测针对VLPs和三种灭活抗原的特异性抗体水平。

03VP60蛋白病毒样颗粒的制备与鉴定

细胞培养与转染选择适合表达VP60蛋白的细胞系，将重组表达质粒转染到细胞中。诱导表达与纯化通过优化诱导条件，使VP60蛋白在细胞中高效表达，并利用亲和层析、离子交换层析等方法对表达产物进行纯化。基因克隆与表达载体构建将编码VP60蛋白的基因克隆到表达载体中，构建重组表达质粒。VP60蛋白的表达与纯化

病毒样颗粒的组装在适当的条件下，VP60蛋白可以自组装成病毒样颗粒（VLPs），通过透射电子显微镜可以观察到VLPs的形态。病毒样颗粒的鉴定采用免疫学方法，如酶联免疫吸附试验（ELISA）或免疫印迹试验，对组装的VLPs进行鉴定，确认其是否具有免疫原性。病毒样颗粒的组装与鉴定

粒径分布与形态观察通过动态光散射仪测定VLPs的粒径分布，并通过透射电子显微镜观察其形态。稳定性分析测定VLPs在不同温度、pH值和离子强度条件下的稳定性，以评估其在实际应用中的潜力。抗原性分析通过免疫学方法分析VLPs的抗原性，确定其是否具有诱导机体产生免疫应答的能力。VP60蛋白病毒样颗粒的理化性质分析

04兔三联灭活疫苗的制备及质量评价

123选择具有良好免疫原性和安全性的兔出血症病毒VP60蛋白毒株，以及其他两种兔用疫苗毒株。毒株来源采用适宜的培养基和培养条件，对毒株进行繁殖和培养，以获得足够数量的病毒颗粒。毒株培养通过一系列的实验和检测，筛选出具有高效价、低毒力、良好稳定性的毒株，用于制备疫苗。毒株筛选疫苗毒株的筛选与培养

灭活剂的选择选择能够有效灭活病毒且对疫苗成分影响较小的灭活剂。灭活条件的优化通过实验确定最佳的灭活温度、时间等条件，确保病毒被完全灭活的同时保持疫苗的免疫原性。灭活工艺的验证对优化后的灭活工艺进行验证，确保每一批疫苗都能够达到预期的灭活效果。灭活工艺的优化及验证

配制工艺的控制严格控制配制过程中的温度、pH值、搅拌速度等参数，确保疫苗成分的均匀混合和稳定性。分装与封口将配制好的疫苗分装到适宜的容器中，并进行封口和贴标，以便于储存和运输。疫苗配方的确定根据疫苗毒株的特点和免疫需求，确定疫苗的配方，包括抗原、佐剂、防腐剂等成分。疫苗的配制与分装

效力评价通过实