(9.12)--ch09高效液相色谱法12键合相色谱.pdf

第四节各类高效液相色谱法

一、吸附色谱

二、化学键合相色谱

三、分子尺寸排阻色谱

四、离子交换色谱

五、离子色谱

六、离子对色谱

一、吸附色谱

固定相：固体吸附剂，分为极性和非极性，例如：硅

胶、氧化镁和硅酸镁分子筛、多孔微粒活性炭、多孔石墨

化炭黑

流动相：各种不同极性的一种或多种有机溶剂。

基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸；

适用于分离相对分子量中等的脂溶性试样，对具有官

能团的化合物和异构体有较高选择性；

缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾

流动相：正相：正己烷or环己烷，以一氯甲烷、二氯

甲烷、三氯甲烷or丙酮作调节剂（溶剂要严格脱水）

二、化学键合相色谱法

•化学键合相：采用化学反应的方法将固定液的官能

团键合在载体表面上形成的固定相

•键合固定相：不流失；化学性质稳定；热稳定性好；

载样量大；适于梯度洗脱

•键合相色谱法：正相～和反相～。

•正相：固定相的极性大于流动相的极性适用于分

离极性与强极性化合物。

•反相：固定相的极性小于流动相的极性，适用于分

离非极性、极性或离子型化合物。

•硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si—C

•C18

键合相色谱固定相

1）非极性键合相：C18、C8、甲基、苯基（反

相柱）

2）中等极性键合相：醚基（正相或反相柱）

3）极性键合相：氨基、氰基（正相柱）

分离原理

•正相键合相色谱

•固定相：极性键合相极性有机基团如胺基（-NH）、腈基

2

（-CN）

•主要靠范德华作用力的定向作用力、诱导作用力及氢键作用力

•流动相极性增大，洗脱能力增强，组分的K值减小

•反相键合相色谱

•固定相：极性较小的键合相，苯基、烷基等

•流动相溶剂的极性大于固定相

•分离机理：疏溶剂作用理论：组分分子中的非极性部分与极性

溶剂产生疏溶剂斥力，与键合相的疏水基团产生疏水缔合作用，

产生保留作用；另一方面，组分分子中有极性官能团时，极性

部分受到极性溶剂的作用，产生解缔作用并减小其保留作用。

疏溶剂作用理论

表示疏溶剂作用

表示极性溶剂的解缔作用

1.烷基键合相2.溶剂膜

3.组分分子极性部分4.组分分子非极

性部分

疏溶剂缔合作用示意图

•决定组分保留值的因素（烷基键合固定相对组分分子的缔合作

用和解缔作用能力之差）：

•①组分分子结构对保留值的影响：

•在反相键合相色谱中，以疏水结构差异为分离依据；

•组分的极性越弱，疏水性越强，保留值越大。

•②烷基键合固定相特性对保留值的影响：

•固定相提供非极性作用表面，键合到硅胶表面的烷基数量决定组分k

的大小。

•碳链↑，疏水性↑，键合相的非极性作用的表面积↑，组分的保留

值↑，选择性↑。

•③流动相性质对保留值的影响：

•流动相的表面张力↑，介电常数↑，极性↑，此时组分与烷基键

合相的缔合作用↑，流动相的洗脱强度↓，组分的保留值↑。

流动相

•正相：正己烷or环己烷，以一氯甲烷、

二氯甲烷、三氯甲烷or丙酮

•反相：水or缓冲盐水溶液，加甲醇、乙

腈or四氢呋喃

谢谢