一种利用蛋白A的高密度包被磁珠纯化抗体的方法[发明专利].pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN102838674A

(43)申请公布日2012.12.26

(21)申请号201210352284.1C07K1/14(2006.01)

(22)申请日2012.09.20

(71)申请人海狸纳米科技（苏州）有限公司

地址215123江苏省苏州市苏州工业园区星

湖路218号生物纳米园A8楼101室

(72)发明人任辉张曙光韩蓝青

乌韦·斯莱泰

安德烈亚斯·布韦特莱瑟刘蔼珊

(74)专利代理机构广州市华学知识产权代理有

限公司44245

代理人裘晖

(51)Int.Cl.

C07K16/00(2006.01)

权利要求书1页说明书6页附图2页

权利要求书1页说明书6页附图2页

(54)发明名称

一种利用蛋白A的高密度包被磁珠纯化抗体

的方法

(57)摘要

本发明公开了一种利用蛋白A的高密度包被

磁珠纯化抗体的方法，该方法包括以下步骤：将

磁珠和含有抗体的表达产物加入到反应容器中，

在反应容器外部或内部施加磁场，然后转移出上

清液；将洗涤缓冲液加入反应容器中，撤去磁场；

重复洗涤磁珠2~4次；然后加入洗脱缓冲液，撤

去磁场，室温下孵育5~15min；施加磁场使磁珠贴

壁，转移出溶液，调节溶液的pH值至中性，得到纯

化后的抗体。本发明使用磁珠亲和分离技术进行

抗体纯化，比传统的抗体亲和层析技术具有更快

的抗体捕获速度；此外，纯化操作无需复杂的层

析系统，样品无需进行澄清处理，可以直接对粘度

较大的样品进行纯化操作；再者，使用了独特的

蛋白A包被磁珠，抗体结合效率大幅提高，蛋白A

A配基的脱落率达到极低水平。

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权利要求书

CN102838674A1/1页

1.一种利用蛋白A的高密度包被磁珠纯化抗体的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）将蛋白A的高密度包被磁珠、含有抗体的表达产物加入到反应容器中，搅匀，室温

下孵育5~15min；

（2）在反应容器外部或内部施加磁场；

（3）从反应容器中转移出上清液；

（4）将洗涤缓冲液加入反应容器中，撤去磁场；重复步骤（2）~（3）一次；

（5）重复步骤（4）洗涤磁珠2~4次；

（6）将洗脱缓冲液加入反应容器中，撤去磁场，室温下孵育5~15min；

（7）施加磁场使磁珠贴壁，转移反应容器中的溶液，调节溶液的pH值至中性，得到纯化

后的抗体；

步骤（4）所述的洗涤缓冲液含有0.01~0.5M的磷酸缓冲液、1~500mM的NaCl，余量为水，

pH值6~9；

步骤（6）所述的洗脱缓冲液含有0.01~4M的氨基酸，pH值1.9~5。

2.根据权利要求1所述的利用蛋白A的高密度包被磁珠纯化抗体的方法，其特征在于：

步骤（6）所述的洗脱缓冲液所含的氨基酸为甘氨酸、赖氨酸或精氨酸中的一种以上。

3.根据权利要求1所述的利用蛋白A的高密度包被磁珠纯化抗体的方法，其特征在于：

步骤（1）所述的含有抗体的表达产物是血清、细胞表达液或腹水。

4.根据权利要求1所述的利用蛋白A的高密度包被磁珠纯化抗体的