(30)--9.1 高效液相色谱法-高效液相色谱及仪器.pdf

了解高效液相色谱的特点及操作流程

掌握高效液相色谱的仪器组成部分及工作原理

掌握化学键合相色谱法的分离机理；了解其他分

离类型的分离机制及应用

HPLC的特点

HPLC的检测流程

HPLC仪器的组成部件

HPLC的特点

特点：“三高一快”高压、高效、高灵敏度和快速。

高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析

方法。

HPLC的检测流程

HPLC仪器的组成部件

高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统及

数据处理系统；此外还有一些附属设备，如梯度洗

脱、自动进样装置。

HPLC仪器的组成部件

1.高压输液系统

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高压输液泵：恒流泵和恒压泵压力：150～350×10Pa

a.恒流泵：往复式柱塞泵

要求：压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等。

HPLC仪器的组成部件

b.恒压泵：气动放大泵pS=pS

1A2B

特点：流动相无脉冲、流量稳定；液缸的体积大，更换流动相不易，不适宜梯度洗脱。

HPLC仪器的组成部件

c.梯度洗脱装置（梯度洗提、梯度淋洗）

所谓梯度洗脱就是流动相含有两种或两种以上不

同极性的溶剂，在分离过程中按一定程序连续改

变流动相的配比和极性，以此来改变被分离组分

的容量因子k和选择性因子，达到缩短分析时

间和提高分离效果的目的。

HPLC仪器的组成部件

2.进样系统

HPLC仪器的组成部件

3.分离系统（色谱柱）

柱体为直型不锈钢管，内径2～6mm，柱长10～50cm。发展趋势是

减小填料粒度和柱径以提高柱效。

HPLC仪器的组成部件

4.检测系统

用于检测经色谱柱分离后的组分的变化，并由

记录仪绘出谱图来进行定性、定量分析。

紫外、荧光、示差折光、电导检测器。

HPLC仪器的组成部件

a.紫外光度检测器ultravioletphotometricdetector

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应用最广，对大部分有机化合物有响应。灵敏度高，10g/mL;

流通池可做的很小（1mm×10mm，容积8μL）；

对流动相的流速和温度变化不敏感；可用于梯度洗脱。

波长可选，易于操作。

HPLC仪器的组成部件

b.光电二极管阵列检测器photodiodearraydetector

由1024个二极管组成，各检测特定波长，紫外检测器的重要发展；

计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。

HPLC仪器的组成部件

c.荧光检测器fluorescencedetector

高灵敏度、高选择性；对多环芳烃，维生

素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、

氨基酸类化合物等有响应。

激光诱导荧光(LIF)

LaserInducedFluorescence

体积小，适合毛细管柱

HPLC仪器的组成部件

d.示差折光检测器

可连续检测参比池和样品池中流动相的折光指数差值，差值与浓度呈正比。

通用型检测器（每种物质具有不同的折光指数）；

灵敏度低、对温度敏感、不能用于梯度洗脱；

偏转式、反射式、干涉式；

HPLC仪器的组成部件

e.电导检测器

根据物质在某些介质中解离后所产生电导变化来测定解离物质的含量。

常用于离子色谱分离系统中的检测器。

HPLC仪器的组成部件

5.数据处理系统

色谱工作站