(31)--9.2 高效液相色谱法 -分离类型与原理1.pdf

液-固吸附色谱

液-液分配色谱

液－固吸附色谱

1.分离原理

液固色谱实质是根据待分离的组分在固定相上的吸附作用不同来进行分离的。

其作用机制是溶质分子和溶剂分子对吸附剂活性表面的吸附竞争。

X＋nM＝X＋nM

madadm

其中Kad为吸附平衡常数，值大表示组分在吸附剂上保留强，难于洗脱。

Kad值小，则保留值弱，易于洗脱，试样中各组分据此得以分离。

液－固吸附色谱

2.固定相

由于硅胶的优点，如线性容量高，机械性能好，

与大多数试样不发生化学反应等，因此，以硅胶

用得最多。

液－固吸附色谱

3.流动相

一般把吸附色谱中流动相称作洗脱剂。在吸附色

谱中对极性大的试样往往采用极性强的洗脱剂；

对极性弱的试样宜用极性弱的洗脱剂。

0

洗脱剂的极性强弱可用溶剂强度参数（）来衡

0

量。越大，表示洗脱剂的极性越强。

液－液分配色谱

固定相与流动相均为液体（互不相溶）

1.基本原理：

组分在两相上的分配系数不同，组分的分离顺序

取决于分配系数K的大小。

与气相色谱不同的是，液相色谱中的流动相对分

配系数影响较大。

液－液分配色谱

2.固定相：

载体有表面多孔型和全多孔型。它们具有填料均匀、粒度小的优点。

液－液分配色谱

（a）涂渍固定液

采用机械涂渍的方式将固定液涂敷在载体表面，

方法简单，便捷，但是固定液易流失。

最常用的强极性固定液β,β－－氧二丙睛，中等

极性的聚乙二醇，非极性的角鲨烷等。

液－液分配色谱

（b）化学键合固定相：

将不同基团通过化学反应键合到硅胶（载体）

表面的游离羟基上。

a.疏水基团：如烷烃C、C和苯基等

818

b.亲水基团：如氨基、氰基等

液－液分配色谱

（c）键合固定相的制备

（l）硅酸酯（≡Si一OR）键合固定相，它是最先用于液相色谱的健合固定相。

用醇与硅醇基发生酯化反应：

≡Si－OH＋ROH→≡Si－OR＋HO

2

由于这类键合固定相的有机表面是一些单体，具有良好的传质特性，但这些酯

化过的硅胶填料易水解且受热不稳定，因此仅适用于不含水或醇的流动相。

液－液分配色谱

（2）硅烷化（≡Si－O－Si－C）键合固定相制备反应：

这类键合固定相（十八烷基键合相）具有热稳定好，不易吸水，耐有机溶剂

的优点。能在70℃以下，pH＝2～8范围内正常使用，应用较广泛。

液－液分配色谱

3.流动相：

对于亲水性固定液，通常采用疏水性流动相，

即固定相的极性大于流动相的极性，称为正相

色谱；反之，固定相的极性小于流动相的极性

的称为反相色谱。

液－液分配色谱

正相色谱适用于极性化合物的分离。其流出顺

序是极性小的先流出，极性大的后流出。

反相色谱适用于非极性化合物的分离，其流出

顺序与正相色谱恰好相反。

液－液分配色谱

总结

键合相色谱的优点：通过改变流动相的组成和种类，可有效地分离各种

类型化合物（非极性、极性和离子型）。此外，由于键合到载体上的基

团不易流失，特别适用于梯度淋洗。

最大缺点：不能用于酸度、碱度过大或存在氧化剂的缓冲溶液作流动相

的体系。