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离子色谱
尺寸（空间）排阻色谱
亲和色谱
离子色谱法
传统离子交换色谱存在着两个难于解决的问题：
1.需要高浓度淋洗液，且洗脱时间很长；
2.洗脱后的组分缺乏灵敏、快速的在线检测方法。
离子色谱法
1.离子色谱流程图
离子色谱法
2.离子色谱法原理
在离子交换色谱柱后加一根抑制柱，抑制柱中装填与分离柱电荷相反的离子交
换树脂。通过分离柱后的样品再经过抑制柱，使具有高背景电导的流动相转变
成低背景电导的流动相，从而用电导检测器可直接检测各种离子的含量。
离子色谱法
若样品为阳离子，用无机酸（HCl）作流动相，抑制柱为高容量的强碱性
-
阴离子交换剂（OH）。当试样经阳离子交换剂的色谱柱分离后，随流动
相进入抑制柱，在抑制柱中发生两个重要反应：
+-+-+-
R－OH＋HCl→R－Cl＋HO
2
+-+-+-+-
R－OH＋MCl→R－Cl＋MOH
离子色谱法
由反应可见：经抑制柱后，一方面将大量酸转变为电导很小的水，消除了流
+
动相本底（HCl）电导的影响。同时，又将样品阳离子M转变成相应的碱，
--
由于OH离子的淌度为Cl离子的2.6倍，提高了所测阳离子电导的检测灵敏度
。
同理对于阴离子样品也有相似的作用机理。
离子色谱法
空间排阻（尺寸排斥）色谱
原理：按分子大小分离。小分子可以扩散到凝胶空隙，由其中通过，出峰最
慢；中等分子只能通过部分凝胶空隙，中速通过；而大分子被排斥在外，出
峰最快。
空间排阻（尺寸排斥）色谱
1.固定相
凝胶，指含有大量液体（水）柔软的物质，它是
一种经过交联而具有立体网状结构的多聚体。
排阻色谱固定相种类很多，一般可分为软性、半
刚性和刚性凝胶三类。
空间排阻（尺寸排斥）色谱
2.流动相
排阻色谱所选用的流动相必须能溶解样品；另外，
溶剂的粘度要小，因为高粘度溶剂往往限制分子扩
散作用而影响分离效果。
亲和色谱法
分离原理：利用生物大分子和固定相表面存在的
某种特异性亲和力，进行选择性分离。
生物大分子中具有这种特异性亲和力，例如酶与
底物、抗原与抗体、RNA与DNA等。
亲和色谱法
先在载体表面键合上一种具有一般反应性能
的所谓间隔臂（环氧、联胺等），再连接上
配基（酶、抗原等），这种固载化的配基将
只能和具有亲和力特性吸附的生物大分子作
用而被保留。
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