北京大学医学部攻读硕-博士学位研究生课题研究计划书.docx

北京大学医学部

博

攻读 士学位争论生课题争论打算书硕

研

学

究

生

号

李玉霞

年

级

2023级

院〔部〕北京大学/香港科技大学医学中心

专业 医学

专

业 医学生物化学与分

导

师

方征宇

课题争论开头日期: 2023年03月 09日

北京大学争论生院医学局部院培育办公室制表

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说 明

一、本打算书由争论生本人在本学科内作过开题报告后填

写，一式三份；经院(部)主管部门批准后一份留教研室，一份留院〔部〕主管部门，一份送争论生院医学局部院培育办公室备案。

二、打算批准后不得随便更改。如有特别状况确需变更者，需填写变更报告，逐级审批。

争论课题名称

黑色素瘤顺铂获得性耐药相关microRNA筛选及其功能的争论

争论课题的目的、理论与实际意义、国内外争论状况简介

课题的目的：

1、构建黑色素瘤顺铂获得性耐药细胞株，与其原始株进展microRNA的高通量筛选比较，找到耐药相关的microRNA，作为潜在的治疗靶点。

2、分析耐药相关microRNA通过调控哪些基因的表达来影响黑色素瘤细胞的耐药性，说明其分子机制。

理论与实际意义：

近几十年来,恶性黑色素瘤在全球的发病率迅猛上升,成为全部恶性肿瘤中发病率增长最快的肿瘤,年增长率几乎到达35%。其中白色人种发病率明显高于其他人种,,我国和日本等亚洲国家的黑色素瘤发病率与欧美国家相比相对较低,但近年来其发病率呈迅猛上升趋势。恶性黑色素瘤治疗方法主要有手术治疗、放射治疗、化学药物治疗及生物免疫治疗等。化疗在恶性黑色素瘤治疗中仍占有重要地位。目前化疗药物主要有顺铂、长春碱和组蛋白去乙酰化酶抑制剂等。顺铂是现在临床上多种化疗方案中的主要药物之一,通过与癌细胞的脱氧核糖核酸发生穿插联结,诱导肿瘤细胞的凋亡而起抗癌作用,属细胞增殖周期非特异性药物，但是多种恶性黑色素瘤常会对顺铂产生自然或获得性耐药,因而提高顺铂的抗肿瘤作用,解决顺铂耐药在恶性黑色素瘤的化疗中有着重要的实际意义。顺铂耐药机制,主要包括细胞内药物积存的削减，DNA损伤修复作用增加,凋亡通路的变化以及一些microRNA的特别表达。由于microRNA的表达易于调控，假设能找到黑色素瘤中与耐药相关的microRNA，可建立以此为靶点的干预手段。

国内外争论状况简介：

在其他肿瘤细胞中，已经有人验证出一些microRNA的变化会影响肿瘤对顺铂的敏感性，而目前关于microRNA在黑色素瘤顺铂获得性耐药机制中的作用争论较少。

主要争论内容

争论内容1：构建黑色素瘤顺铂耐药株

选取了七种黑色素瘤细胞系M7、M21、SK-MEL-103、M29、A375、M8、SK-MEL-19依次检测对顺铂的敏感性,在对顺铂比较耐受的细胞株中选取了A375、M8、SK-MEL-19构建了顺铂耐药株并将A375、M8做了microRNA的表达谱芯片。

争论内容2：黑色素瘤顺铂耐药株与原始株microRNA芯片分析及验证

通过分析microRNA表达谱芯片，对黑色素瘤顺铂耐药株中特别表达的microRNA用荧光定量PCR进展验证，确定要争论的microRNA。

争论内容3:顺铂耐药相关基因反向筛选推测microRNA

查阅文献，汇总顺铂耐药相关基因，在黑色素瘤顺铂耐药株与原始株中用荧光定量 PCR

验证，依据耐药基因的变化反向推测microRNA。

争论内容4：microRNA对黑色素瘤顺铂耐药的影响及其分子机制

依据microRNA靶基因推测数据库找到靶基因，进一步争论microRNA对顺铂黑色素瘤耐药的影响及其分子机制。

主要争论方法

1、构建黑色素瘤顺铂耐药株

MTS法检测药物敏感性以及顺铂耐药株的耐药指数。

2、黑色素瘤顺铂耐药株与原始株microRNA芯片分析及验证

Real-timePCR验证microRNA芯片结果。

3、顺铂耐药相关基因反向筛选推测microRNA

Real-timePCR验证顺铂耐药相关基因，microRNA靶基因推测数据库分析结果。4、microRNA对黑色素瘤顺铂耐药的影响及其分子机制

Dual-LuciferaseReporter验证microRNA与靶基因的关系，慢病毒构建靶基因相关稳转株，WesternBlotting验证靶基因相关蛋白的变化。

争论进度及具体安排

2023年3月-2023年8月进度：黑色素瘤顺铂耐药株构建

2023年9月-2023年12月进度：microRNA芯片分析及验证,顺铂耐药相关基因的筛选

2023年1月-2023年10月安排：microRNA