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人甲胎蛋白(AFP)说明书
人甲胎蛋白(AFP)酶联免疫分析(ELISA)
试剂盒用说明书
本试剂仅供研究用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中甲胎蛋
白(AFP)的含量。
实验原理:
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人甲胎蛋白(AFP)水平。用纯化的人甲胎蛋
白(AFP)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入甲胎蛋白
(AFP),再与HRP标记的甲胎蛋白(AFP)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,
经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化转化成蓝色,并在酸的作用
转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的甲胎蛋白(AFP)呈正相关。用酶标仪在
450nm波长测定吸光度(OD),通过标准曲线计算样品中人甲胎蛋白(AFP)浓度。
试剂盒组成:
试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份
封板膜2片(48)2片(96)
密封袋1个1个
酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品:45μg/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保
存标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃
保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保
存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩
洗涤液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存
样本处理及要求:
1.血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上
清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2.血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,
离心
20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该
再次离心。
3.尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保
存过程
中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4.细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-
3000转/
分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,
细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以细胞破坏并放出细胞内成份。离心20
分
钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离
心。5.组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻
保存备
用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀
浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后
一份待检测,其余冷冻备用。
6.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能
马上
进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
7.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤:
1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别
加标
准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第
二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,
混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第、第六孔中,
再在第、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第、第六孔中各取
50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后
从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释
液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分
别为30μg/L,20μg/L,10μg/L,5μg/L,2.5μg/L)。
2.
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