乳与乳制品中亚硝酸盐的测定.pdfVIP

二、乳与乳制品中亚硝酸盐的测定：

亚硝酸盐广泛存在于自然界，在乳与乳制品中都有一定的含量。现已证明，亚硝酸盐与食品

中固有的胺类化合物是产生致癌物质-亚硝胺的前体物质，是潜在的致癌物质，亚硝酸盐含

量过高会引起高铁蛋白症。因此，对乳与乳制品亚硝酸盐含量的检测和控制是非常有必要的。

在乳与乳制品测定亚硝酸盐的过程中，将样品沉淀脂肪和蛋白质后，进行过滤。在滤液中加

入磺胺和N-1-萘基-乙二胺二盐酸盐，使其显粉红色，然后用分光光度计在其最大吸收波长

538nm下测定其吸光度。将测得的吸光度与亚硝酸钠标准系列溶液的吸光度进行比较定量。

1主要试剂和仪器

1.1仪器：UV-2550型紫外可见分光光度计（岛津有限公司）

1.2试剂：

标准亚硝酸盐溶液：GBW（E）0802230504水中亚硝酸盐-氮,浓度：100mg/mL,并逐级稀

释为0.9857μg/mL的标准贮备液；

硫酸锌溶液：535g/L;亚铁氰化钾溶液：172g/L;

盐酸-氨水缓冲溶液：pH9.6~9.7；

显色液1：盐酸：水=450：550（V：V）盐酸溶液；

显色液2：5g/L磺胺溶液；

显色液3：1g/L萘胺盐酸盐溶液。

试验中所用试剂均为分析纯，所用水为去离子水。

2试验方法

2.1入射光波长的选择

国标《GB/T5413.32-1997乳粉硝酸盐、亚硝酸盐的测定》中规定最大吸收波长为538nm，

但在实验过程中，做光谱扫描时，最大吸收波长往往因为样品的不同而发生变化，发上红移

或蓝移的现象。考虑到测定的灵敏度，应采用最大吸收波长作为入射光波长。所以，在进行

定量分析之前，应先才用光谱扫描进行峰形和峰位的确认。

以表1的仪器条件，对亚硝酸盐标准系列进行扫描，光谱图如图1。图1中曲线均比较平滑，

为了消除干扰组分的吸收，采用吸收最大，“干扰最小”的原则，即所选择的测定波长处待测

组分的吸收最大，但干扰组分的吸收最小；从消除非单色光引起的对郎伯比尔定律的偏离角

度考虑，应选用吸收曲线比较平坦部分对应波长的光作为入射光波长。

综上所述，应选择图1中538nm作为入射光波长，与国家标准一致。

图1标准系列吸收光谱图

2.2标准曲线

标准曲线的绘制：取6个50mL容量瓶，分别加入浓度为0.9857μg/mL的亚硝酸钠标

准贮备液0.0，0.5，1.0，2.0，5.0，10.0mL，加水至20mL，然后依次加入3mL显色液1，

2.5mL显色液2，混合均匀后，静置5min,加1mL显色液3,静置5min，用去离子水定容至

刻度,此溶液浓度分别为0.00、9.86、19.72、59.14、98.56、197.14μg/L。静置5min后于

538nm处，用１cm比色皿进行测定，并以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线(见

图2)

图2亚硝酸盐标准曲线

标准曲线方程为A=0.0011C-0.0005，相关系数r2=0.9999。

2.3样品测定

2.3.1样品前处理

称90.0g左右牛乳样品，按顺序加入25mL硫酸锌溶液，25mL亚铁氰化钾溶液，40mL盐

酸-氨水缓冲溶液，每加一种试剂充分混合，用去离子水定容于250mL容量瓶中，静置40min,

用定性中速滤纸过滤后收集滤液。

2.4.2样品测定

移取20mL滤液于50mL容量瓶中，加3mL显色液1，2.5mL显色液2，摇匀，静置5min；

加1mL显色液3，静置5min，定容后静置5min，上机测定。

3结果与讨论

干扰消除一般有两种方法，一类是不分离的情况下消除干扰，另一类是分离杂质消除干扰。

因为在分离过程中，会造成硝酸盐和亚硝酸的损失，所以一般在不分离的情况下消除干扰。

本试验采用双光束分光光度法，在不分离的情况下消除干扰。

3.1在样品前处理后，在滤液中的某些成分影响被测组分吸光度时，将构成干扰，影响测量

结果的准确性。干扰离子与试剂生成有色配合物，使测定结果偏高；干扰离子与试剂反应，

生成的配合物虽然无色，但消耗大量的显色剂，使被测离子的显色反应不完全，使测定结果

偏低；与被测离子结合成离解度小的另一种化合物，使被测离子与显色剂不反应，使测定结

果偏低。

加入盐酸-氨水缓冲溶液，控制溶液的酸度，从