DB23T-大豆胞囊线虫病抗性基因rhg1和Rhg4的基因型鉴定技术规程.pdfVIP

ICS65.020.01

CCSB10

黑龙江省地方标准

DB23/TXXXX—XXXX

大豆胞囊线虫病抗性基因rhg1和Rhg4的

基因型鉴定技术规程

（征求意见稿）

起草单位：东北农业大学

联系人：韩英鹏

电话

邮箱：hyp234286@

XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施

发布

前言

本文件依据GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由黑龙江省农业农村厅提出。

本文件起草单位：东北农业大学。

本文件主要起草人：韩英鹏、战宇航、赵雪、姜海鹏、滕卫丽、李永光、李海燕。

I

大豆胞囊线虫病抗性基因rhg1和Rhg4的基因型鉴定技术规程

1范围

本标准规定了大豆抗胞囊线虫病基因rhg1和Rhg4的优异等位基因型的分子检测标准技术规程。

本标准适用于鉴定大豆是否携带抗病基因rhg1和Rhg4的优异等位基因型。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

NY/T1788大豆品种纯度鉴定技术规程SSR分子标记法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

竞争性等位基因特异性PCR

竞争性等位基因特异性PCR（kompetitiveallele-specificPCR，KASP）是一种基于荧光的同质基因

分型技术。

3.2

rhg1点位

rhg1是大豆胞囊线虫重要抗性位点之一，其3个关键基因已通过图位克隆获得。

3.3

Rhg4位点

Rhg4是大豆胞囊线虫重要抗性位点之一，其关键基因(GmSHMT)已通过图位克隆获得。

4鉴定的基本原则

KASP(KompetitiveAllele-SpecificPCR)分子标记技术基于终端荧光信号的读取判断，每孔反应

都是采⽤双⾊荧光检测⼀个SNP位点的两种基因型，不同的SNP对应着不同的荧光信号。KASP反应包括

PrimerMix和MasterMix两种主要成分。PrimerMix由两条末端碱基不同的等位基因正向引物与⼀条反

向引物构成，两条正向引物5’端分别连有不同序列的检测引物序列。MasterMix包含两条带有不同荧光

的检测引物。变性模板与PrimerMix中相匹配的引物结合并退⽕，延伸后序列被加上了检测引物的序列。

等位基因特异性的末端序列的互补链合成。带有不同荧光的两条检测引物与互补链结合，特异序列对应

的检测引物随PCR反应指数性扩增，相应荧光信号被检测。利用rhg1和Rhg4关键基因内的抗病关键突变

对应序列设计KASP标记引物，通过基因分型结果判断被测大豆是否携带两个抗病基因优异等位型的大豆

品种，从而判断被测品种对大豆胞囊线虫病的抗性。

1

5rhg1和Rhg4的基因型鉴定的步骤

5.1样品采集

大豆苗期幼嫩叶片或种子用于基因组DNA的提取。

5.2大豆基因组DNA提取

若以