酶免疫技术医学宣教专家讲座.pptxVIP

第二节酶免疫技术分类

一、均相酶免疫测定

二、非均相酶免疫测定

第三节酶联免疫吸附试验

一、基本原理

二、方法类型及反应原理;放射免疫技术;

第一节酶免疫技术特点

;主要试剂:

酶标识抗体或抗原

酶标物特点：

免疫学活性

酶对底物催化活性;特点：

灵敏度高、特异性强、准确性好

酶标识试剂能够较长时间保持稳定

操作简便、对环境没有污染。

易与其它技术偶联

衍生出适用范围更广新方法。;标识酶要求：

活性高

性质稳定

专一性强

酶催化底物显色信号易于判断和测量

方法敏感，重复性好，简单易行

酶底物易于配制保留，酶及底物价廉

;辣根过氧化物酶（HRP）;

碱性磷酸酶（AP）

;HRP底物;HRP常见底物;OPD反应后显橙黄色，加酸终止反应后呈棕黄色，测定波长492nm。不稳定，致癌性。;AP

底物;酶免疫技术关键组成部分;抗原要求纯度高，抗原性完整;制备方法要求;制备方法;戊二醛交联法;纯化及判定;固相抗体或抗原是非均相酶免技术中将游离和结合酶标识物快速分离最惯用方法;要求;将抗原或抗体结合于固相载体;

第二节酶免疫技术分类

;;用于小分子激素和半抗原（如药品）测定;最具代表性两种技术;EMIT示意图;CEDIA示意图;分类：液相酶免疫测定

固相酶免疫测定

以聚苯乙烯等材料作为固相载体酶联免疫吸附试验（ELISA）是当前最为惯用固相酶免疫测定;

第三节酶联免疫吸附试验

;;固相抗原或抗体;双抗体夹心法

方法：用已知抗体包被，加入待检血清，再加酶标抗体，加底物显色

应用：

二价或二价以上较大分子抗原测定

乙型肝炎表面抗原、甲胎蛋白、HCG等;;;竞争法

方法：用已知抗体包被，加入待测血清，再加酶标抗原，酶标抗原与待检物竞争与包被物结合。加底物显色。

应用：用于只有一个抗原决定簇小分子半抗原（药品、激素等）;;;;;;双抗原夹心法

原理：类似双抗体夹心法

操作步骤：类似

应用：乙型肝炎表面抗体;竞争法

原理：类似检测抗原竞争法

应用：乙型肝炎病毒关键抗体(HBcAb)和乙型肝炎病毒e抗体(HBeAb)检测;捕捉法

应用：

病原体急性感染诊疗中IgM型抗体

甲型肝炎HAV-IgM抗体

乙型肝炎病毒关键HBc-IgM抗体;捕捉法;;

第四节酶免疫测定应用

;均相酶免疫测定主要用于药品和小分子物质检测。非均相免疫测定中ELISA应用更为广泛，ELISA广泛用于传染病诊疗，病毒如病毒性肝炎（甲肝抗体、“乙肝三对”、丙肝抗体、丁肝抗体、戊肝抗体）、风疹病毒、疱疹病毒、轮状病毒等；细菌如结核杆菌、幽门螺杆菌等。也用于一些蛋白质检测，如各种免疫球蛋白、补体、肿瘤标志物（甲胎蛋白、癌胚抗原、前列腺特异性抗原等）。;1．酶免疫技术关键点？

2．酶联免疫吸附试验原理（ELISA）？

3．竞争法在酶联免疫检测应用中原理和应用？

4．惯用底物有哪几类？特点？

5．惯用酶有哪几类？特点？

6．何谓包被与封闭？其作用？

7．惯用固相载体种类和特点？

8．举例固相酶免疫测定应用原理及影响原因。

9．ELISA非特异性干扰有哪些，其机制？

10．对酶免疫技术应用评价怎样？;酶免疫技术是标识免疫技术一个，它是以酶标识抗原或抗体作为主要试剂免疫检测方法，在抗原与抗体特异性反应完成后，经过酶对底物作用深入提升敏感性。酶免疫技术可分为酶免疫组织化学技术和酶免疫测定两大类,后者依据抗原抗体反应后是否需要分离结合与游离酶标识物而分为均相和非均相两种类型。

均相酶免疫测定主要用于小分子激素和半抗原测定，非均相酶免疫测定依据是否使用固相支持物，又可分为液相和固相酶免疫测定两种类型。最惯用是以聚苯乙烯等材料作为固相载体酶联免疫吸附试验（ELISA）,其原理能够有夹心法、竞争法、间接法和捕捉法等。