（正式版）H-Y-T 177-2014 海水中硫酸盐还原菌的测定 MPN法（正式版）.docxVIP

ICS07.060;13.060

Z17

中华人民共和国海洋行业标准HY/T177—2014

海水中硫酸盐还原菌的测定MPN法

Determinationofsulfate-reducingbacteriainseawater—MPNmethod

2014-06-25

发布

2014-12-01实施

国家海洋局发布

I

HY/T177—2014

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由国家海洋局天津海水淡化与综合利用研究所提出。

本标准由全国海洋标准化技术委员会(SAC/TC283)归口。

本标准由国家海洋局天津海水淡化与综合利用研究所、浙江国华浙能发电有限公司负责起草。本标准主要起草人：李亚红、赵小芳、张益、朱介南、周筝、元昊、吴彭杰、王会、周幸笛。

1

HY/T177—2014

海水中硫酸盐还原菌的测定MPN法

1范围

本标准规定了海水中硫酸盐还原菌的MPN测定方法。

本标准适用于海水及海水利用浓海水中硫酸盐还原菌的测定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T16310.1—1996船舶散装运输液体化学品危害性评价规范水生生物急性毒性试验方法

3术语和定义

3.1

3.2

3.3

下列术语和定义适用于本文件。

硫酸盐还原菌sulfate-reducingbacteria

一类在无氧或缺氧状态下，能将水中可溶性的硫酸盐还原为硫化氢的细菌。

MPN法MPN(mostprobablenumber)method

应用多管发酵技术，采用概率理论估算细菌浓度的方法。

陈海水agedseawater

取自未污染海域，装入玻璃瓶后储放在暗处15d以上的海水。

4方法原理

本方法采用多管发酵技术，在(29±1)℃培养21d,如果试管底部产生黑色硫化铁沉淀并伴有硫化氢臭味的，表明阳性反应，采用MPN法对被测试样中的硫酸盐还原菌进行计数。

5试剂与材料

本试验方法中，除特殊规定外，应使用分析纯试剂和符合GB/T6682中三级水规格的水。

试验所需试剂与材料如下：

a)磷酸氢二钾；

b)无水氯化钙；

c)氯化铵；

d)硫酸镁；

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HY/T177—2014

e)硫酸钠；

f)酵母汁；

g)乳酸钠；

h)硫酸亚铁铵；

i)半胱氨酸；

j)硫代硫酸钠；

k)陈海水；

I)人工海水：按GB/T16310.1—1996配制；

m)氢氧化钠溶液：160g/L;

n)盐酸溶液：1+11;

o)牛皮纸，

6仪器与设备

6.1无菌箱(室)或超净工作台。

6.2蒸汽压力灭菌器。

6.3生化培养箱：(29±1)℃。

6.4电热干燥箱：温度控制范围60℃~280℃,允差±2℃。

6.5电热恒温水浴锅：恒温范围37℃~100℃,允差±1℃。

6.6天平：称量范围0g～220g,感量0.01g。

6.7冰箱。

6.8振荡器。

6.9刻度吸管或移液器：1mL、10mL。

6.10量筒：500mL、1000mL。

6.11刻度三角瓶：150mL(磨口);500mL。

6.12烧杯：1000mL。

6.13无菌试管：直径18mm,长度180mm,配硅胶塞。

6.14无菌试管：直径15mm,长度150mm,配橡胶塞。

6.15无菌刻度吸管或移液器和Tip头。

6.16无菌采样瓶：广口玻璃瓶或聚丙烯(PP)塑料瓶。

注：6.13～6.16中的试管、硅胶塞、刻度吸管或移液器和Tip头、采样瓶均须经蒸汽压力灭菌器(121±1)℃灭菌20min后，烘干冷却备用。

6.17试管架。

6.18pH计或精密pH试纸(6.4～8.0)。

7试验前准备

7.1无菌水

将水分装在2个150mL磨口三角瓶(6.11)中，每瓶40mL,每个三角瓶塞子和瓶口间插入一小纸片来防止粘连，瓶口均用牛皮纸包扎，用蒸汽压力灭菌器(121±1)℃灭菌20min,冷却后备用。

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HY/T177—2014

7.2培养基

7.2.1成分

成分如下(每升中的含量):

a)磷酸氢二钾

b)