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实验十四样品中菌落总数的检测
一、目的要求
学习并掌握样品中菌落总数(平板菌落计数)的原理和方法。
二、实验材料
1.样品:鲜啤酒
2.培养基:营养琼脂培养基
3.设备仪器:10ml无菌吸管1支、1ml无菌吸管4支、无菌带塞空试管3支、无菌空培养皿9
套、酒精灯、试管架、无菌生理盐水、玻璃珠、温箱36℃±1℃、天平等。
三、基本原理
菌落总数是指食品检样经过处理,一定条件下培养后,所得1克或1毫升检样中所含细
菌菌落的总数。
菌落总数主要作为制定食品被污染程度的标志,也可以应用这一方法观察细菌食品中
繁殖的动态,以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。
每种细菌都有它一定的生理特性,培养时,应用不同的营养条件及其他生理条件(如温
度、培养时间、pH、需氧性质等)去满足其要求,才能分别将各种细菌都培养出来。但实
际工作中,一般都只用一种常用的方法去作细菌菌落总数的测定。所得结果,只包括一群能
营养琼脂上发育的嗜中温性需氧菌的菌落总数。
四、检验程序
菌落总数的检验程序如下:
五、操作步骤
1.检样稀释及培养
(1)以无菌操作,将检样25g(或25ml)剪碎放于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的
灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨作成1:10的均
匀稀释液。
固体检样加入稀释后,最好置灭菌均质器中以8000~10000r/min的速度处理1分钟,
作成1:10的均匀稀释液。
(2)用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml时,沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或
其他稀释液的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液),振摇试管混合均匀,作成1:100
的稀释液。
(3)另取1ml灭菌吸管,按上面各项操作顺序,作10倍递增稀释液,如此每递增稀释一次,
即换用1支灭菌吸管。
(4)根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计,选择2~3个适宜稀释度,分别
作10倍递增稀释的同时,即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内,每个稀释度
作两个平皿。
(5)稀释浓移入平皿后,应及时将凉至46℃营养琼脂培养基(可放置于46℃±1℃水浴保
温)注入平皿约20~25ml,并转动平皿使混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释
液(不含样品)的灭菌皿内作空白对照。
(6)待琼脂凝固后,翻转平板,置36℃±1℃温箱内培养24土2h(肉、水产、乳和蛋品为
48±2h)取出,计算平板内菌落数目,乘以稀释倍数,即得每克(或毫升)样品所含菌落总数。
2.菌落计数方法
作平板菌落计数时,可用肉眼观察,必要时用放大镜检查,以防遗漏。记下各平板的
菌落数后,求出同稀释度的各平板平均菌落数。
3.菌落计数的报告
(1)平板菌落数的选择
选取菌落数30~300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板,
应采用两个平均数,其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落
生长的平板作为该稀释度的菌落数,若片状菌落不到平夜的一半,而其余一半中菌落分布又
很均匀,即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。
(2)稀释度的选择
①应选择平均菌落数30~300之间的稀释度,乘以稀释倍数报告之(见表例1)。
②若有两个稀释度,其生长的菌落数均30~300之间,则视二者之比如何来决定,若
其比值小于2,应报告其平均数;若大于2则报告其中较小的数字(见表例2及3)。
③若所有稀释度的平均菌落数均大于300,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍
数报告之(见表例4)
④若所有稀释度的平均菌落数均小于30,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数
报告之(见表例5)。
⑤若所有稀释度均无菌落生长,则以小于()1乘以最低稀释倍数报告之(见表例6)。
⑥若所有稀释度的平均菌落数均不30~300之间,其中一部分大于300或小于30时,
则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表例7)。
(3)菌落数的报告
菌落数100以内时,按其实有数报告;大于100时,采用二位有效数字,二位有效数
字后面的数值,以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零数,也可用10的指数来表示(见
表报告方式栏)。
六、结果
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