基因工程基本知识和基本技术.pptx

基因工程基本知识和基本技术;;掌握基因结构，基因表示概念、过程及操纵子学说；掌握DNA分离与纯化、电泳技术及PCR技术；了解核酸分子杂交、DNA序列分析技术和基因突变技术。;基因：产生一条多肽链或功效RNA所必需全部核苷酸序列，由结构基因和调整基因组成。

结构基因：转录成各种RNA直接行使功效；转录成mRNA，翻译成功效蛋白质。

调整基因：调整或限制其它基因活性基因，如开启子，增强子，终止子等。;DNA1）结构简练（基因组小，DNA含量少）

2）大多用于编码蛋白质

3）形成功效单位或转录单元，多顺反子

4）有重合基因

mRNA1）半衰期短2）以多顺反子形式存在

3）存在SD序列;DNA

1）不连续性（内含子，外显子）连接区为高度保守和特异碱基序列

2）高度重复序列卫星DNA

mRNA

1）5′帽子结构

2）具ploy（A）尾

3）单顺反子;就是基因转录及翻译过程。在一定调整机制控制下，大多数基因经历基因激活、转录及翻译等过程，产生含有特异生物学功效蛋白质分子。

但并非全部基因表示过程都产生蛋白质，编码tRNA、rRNA基因转录合成RNA过程也属于基因表示。;转录与翻译几乎同时发生，表示调控主要发生在转录水平上。;真核生物基因表示;Jacob和Monod对大肠杆菌乳糖代谢机制研究发觉，一些基因只起调整或操纵作用，于1961年提出了乳糖操纵子模型，开创了基因表示调整机制研究新领域。

操纵子：基因表示协调单位，有共同控制区和调整系统。包含在功效上彼此相关结构基因和控制部位。

乳糖操纵子：

阻遏子I开启子O操纵子P结构基因Z、Y、A;乳糖操纵子基因表示调控模型;;代谢产物对基因活性调整;密码子

道生一，一生二，二生三，三生万物;信息流

新陈代谢是物质与能量流动

推进物质流动是能量

动力

物质怎样流动？

信息决定

;前者是能够转录成各种RNA，或者转录成信使RNA然后翻译成多肽链，最终形成各种功效蛋白质和酶；后者指一类能够调整或限制其它基因活性基因。

管家基因和奢侈基因

含有相同遗传信息个???细胞其所利用基因并不相同，有基因活动是维持细胞基础代谢所必需，而有基因则在一些分化细胞或受到外界刺激细胞中活动。

前者为管家基因（house-keepinggene），如编码核糖体蛋白、线粒体蛋白、糖酵解酶等基因；后者为奢侈基因（luxurygene），如胰岛素中β细胞合成胰等。;移动基因

可移动遗传因子。如：转座子，它能从一个位点转座到另一个位点，或从一个复制子转座到另一个复制子。

重合基因

不一样基因间存在相互共用核苷酸序列，这么基因称为重合基因（overlappinggenes）。

基因组（genome）

一个生物体、细胞器或病毒全部基因。;假基因

讨论假东西

假币假牙

有其形无其能

进化中间体

基因还在进化发展;作业;因为提取DNA目标、种类、所用生物、组织材料、试验条件等不一样，DNA提纯有很多方法。其中最常见是碱抽提法。;GenomicDNA;闭合环状质粒DNA，在变性后不会分离，复性快；;;①溶菌酶;③EDTA;冰醋酸把醋酸钠溶液pH调到4.8。

用来中和NaOH变性液，使DNA复性。;⑦RNaseA;液体蛋白变性剂，深入抽提DNA溶液中蛋白质，使蛋白质沉淀，但苯酚会残留在DNA溶液中。（现多用各种商品化层析柱纯化DNA）。;SolutionI配制：;溶液II破坏细胞膜，蛋白质和DNA变性。;上清液中含有闭合质粒DNA。;最主要是：;这是直接决定DNA产量主要原因之一。;1）细胞裂解;动物组织剪成小块，置液氮中冻结后研磨成细粉末。

组织培养细胞用胰酶消化涣散后直接使用。;3）纯化DNA;1）组织粉碎;;1）紫外光谱法;蛋白核酸定量测定仪;;普通使用琼脂糖凝胶电泳，与已知分子量DNA标准混合液对比得知。;DNAladder;1.2.2电泳技术;基础原理;;Relaxed;;;琼脂糖浓度（%）;4）低熔点胶（LMP）;EB是扁平分子，能插入DNA碱基之间，但不与琼脂糖结合。

EB在300nm紫外光照射下能发红色荧光，即可显示DNA泳带在凝胶中所处位置。

荧光强度与DNA含量及大小成正比。;;;UVP全自动凝胶成像分析系统;OMEGA8